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泌乳素(PRL) ELISA试剂盒说明书

泌乳素(PRL) ELISA试剂盒德国DRGEIA1291)

1、实验原理
   DRG公司的泌乳素酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。反应板上的微检测孔包被有能结合泌乳素分子上独特抗原位点的单克隆抗体。一份含有内源性泌乳素的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育,该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后,用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中泌乳素的浓度成正相关。加入底物溶液后,显出的颜色强度与病人样品中泌乳素的浓度成正比。
2、试剂盒成分
1)       微量反应板,1块 ( 96孔) ,微孔中包被了抗泌乳素的单克隆抗体。
2)       酶联物,11ml,辣根过氧酶标记的泌乳素抗血清。 
3)       底物液,11ml (TMB)
4)       标准系列,6支(冻干粉),浓度:0;5;20;50;100;200ng/ml
转换系数(1ng/ml=21.1mUI/mL)
5)       终止液,0.5M的 H2SO4,6ml
3、实验需要器材(但试剂盒不提供)
1)       酶标仪(450±10nm)。
2)       移液器
3)       吸水纸
4)       标准水箱
5)       蒸馏水
6)       计时器
4、试剂贮存:
   未开启的试剂在2—8℃下贮存,在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂,酶联物、底物溶液、标准品和零标准品必须在2—8℃下贮存。
   微孔反应板必须在2—8℃下贮存。一旦包装袋被打开,必须将它小心地严封起来。如果包被板的包装被打开,其免疫活性在2个月内稳定,但前提是必须将它密封在装有干燥剂的袋子里。
5、样品的采集
1)       静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下用离心机分离血清,避免溶血。注意:此试剂盒只能使用没用任何添加剂的样品。
2)       必须盖住样本并在实验之前于2-8℃下可贮存48小时。样品需要更长的贮存时间,则应将样品冻存于-20℃的环境下。解冻的样本在检测之前必须上下倒置几次。
注意:用于此试剂盒的样品不能含有任何添加剂。
6、试剂的准备
参考标准:在冻干的标准品中加入1.0ml双蒸水。
注:配制好了的标准品可在2-8℃下稳定存放2个月。想要存放更长时间应当将其冻存于-20℃的环境下。
7、一般注意事项
1)       实验开始前,将所有试剂和样本都平衡至室温,试剂混合时避免起泡。
2)       实验一旦开始,所有的步骤应完整地进行下去。
3)       每一样品的取样都得使用新的取样吸头。
4)       吸光度与温育时间和温度有关,在实验开始后所有的试剂都应准备好,以保证加液时间的一致。
5)       本试剂盒zui大吸光度(OD)在1.200-2.000之间(室温22℃,显色10分钟以内)。如果zui大OD值高于您酶标仪的上限或低于1.000,则相应的减少或延长显色反应的温育时间。一般情况下,酶免反应的强度与时间和温度成线性,这使得操作者应当适当的调整物理化学环境。
8、实验步骤
1)       将所需数目的板条置于板架上。
2)       将黄体生成素标准系列(0;5;20;50;100;200ng/ml)、质控和血清样本分别25μl加入到相应的微孔中,每一样品都得使用新的取样吸头。
3)       加100μl的抗泌乳素酶联物于各孔中。
4)       混匀10秒,此步骤中完全混匀很重要。
5)       室温温育(22℃)30分钟。
6)       弃去孔内的反应液。
7)       用蒸馏水洗板5次。
8)       在吸水纸上把板拍干。
9)       依原先加样顺序,每孔加100μl底物液。
10)   室温(22℃)温育10分钟。
11)   按加底物液顺序,每孔加50μl终止液于各孔中。
12)   10分钟内在450±10nm波长读吸光度。
9、结果计算
1)       计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。
2)       用吸光度值作为纵坐标(y),浓度值作为横坐标(x),以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值(mIU/ml)进行标绘,作一条标准曲线。
3)       用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。根据自己的实际经验或计算机的功能,也可以采用其它的归纳方法进行计算。
4)       如果样本的浓度高于zui高浓度的标准品的浓度或者浓度>200ng/ml,则需要进行稀释,任何稀释了的样品在计算时都必须将相应的稀释因子考虑进去。
10、参考值
我们强烈建议各个实验市都建立自己的正常值和异常值。以下结果是以一定量正常人群的血液样本为准得出的实验结果:

性别
平均值(ng/ml)
S.D.(ng/ml)
5%(ng/ml)
95%(ng/ml)
男性
6.44
5.50
0.94
20.94
女性
14.27
5.88
2.39
25.15

 
灵敏度:zui小检测出的泌乳素浓度为0.35ng/ml
 
 
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
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