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挑选到合适自己试验的抗体尤为重要
  一、关于特异性的挑选:
 
    特异性的挑选首要需求考虑四个方面:蛋白特异性、种属特异性、试验方法特异性、符号物的特异性。
 
    1、蛋白特异性:
 
    针对需求检测的蛋白查找抗体,几个细节要区分,重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测,对抗体的要求是不一样的,注意检查抗体说明书的检测说明。假如重组蛋白不是全长表达,则需求注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白能清楚其剪切与润饰的方式,特殊表型的蛋白需求进行序列比对,并结合抗体免疫原序列,检查穿插反应的状况。磷酸化蛋白检测需求确认具体位点,不同位点的磷酸化意味着或许有不同的机制存在,不宜混为一谈。
 
    2、种属特异性:
 
    同种蛋白不同物种,有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或规划多肽抗原的,根据蛋白的同源性状况与其他种属发生穿插反应。需求参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体,可以经过蛋白的序列比对,挑选同源序列免疫的抗体,不过一般这种状况生产商不会受理其关于质量的申述,假如可以申请到免费的抗体样品,则利于抗体挑选。。
 
    3、符号物的特异性
 
    一般基于试验操作的试验方法不会运用带有符号的一抗,比方WB、IHC等,都是经过二抗类的试剂符号达到成果出现的意图。可是基于仪器剖析的一些试验,或许就会运用到直接符号的一抗,比方流式试验。那么需求了解到自己将要运用的仪器能检测到的荧光规模,针对不通的参数要求挑选对应的符号物。在免疫荧光双标试验中,需求选配不同的荧光符号物。
 
    二、抗体种属来历的挑选:
 
    有人以为单抗比多抗好,其实这并不是一个严谨的观点,只能说在或许性上单抗的特异性更好一些,而多抗的亲和力会优于单抗,而且特异性并不一定就逊于单抗,首要看抗原的规划水平。目前商品化抗体里单抗首要是鼠单抗、兔单抗,多抗首要是兔多抗、山羊多抗等,其他种属来历抗体较少。不主张纠结于单抗好还是多抗好,能做出试验的抗体便是好抗体。
 
    在挑选上一般主张试验种属和抗体种属亲缘性越远越好,不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标试验中,需求在差异于试验种属的基础上,区分开两个目标的抗体种属来历,以便于二抗差异识别。
 
    三、关于品牌的挑选:
 
    由于抗体品质的异质化,关于抗体的品牌挑选就被我们所注重,可是不管是什么品牌都难免会遇到不合适自己试验的抗体。所以一般主张考虑那些业界普遍认可、购买方便、专业、售后处理快捷的品牌。一些乃至都没有正式代理的,只能备选。一起购买时一定要找可以供给产品指导、试验剖析、售后处理的正规代理商购买,防止由于买到假货水货影响试验。
 
    别的不要纠结于WB过程中分子量的问题。许多时候,我们看到相同的抗体,不同的品牌,乃至同一品牌不同的货号,标注的分子量都不一样。其实或许只是生产商只检测时运用了不同的种属不同的样品类型,或是参照了不同的文献,对运用者来说,相同的样品,不管运用哪个品牌的,只需抗体是对的,意图条带只会出现在相同的位置。
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