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神经丝轻链蛋白(NF-light)试剂盒是如何进行检测实验的?
  神经丝轻链蛋白检测试剂盒能在脑脊液中定量检测人神经丝轻链蛋白(NF-light)。该抗体与大鼠、牛和猕猴的神经丝轻链交叉反应,故可用于上述种类的检测。
  神经丝轻链蛋白检测试剂盒使用酶免法定量检测人脑脊液中的神经丝轻链(NF-light)。该实验使用两种高特异性的非竞争性单克隆抗体。主要的细胞骨架成分。对于保持轴突口径和形态的完整十分重要,影响着神经传输的速率和准确性。存在着三种不同的神经丝链,根据其大小而定义,分别为神经丝轻链、神经丝中链和神经丝重链。
  神经丝轻链组成了重链的骨架,重链聚集形成了神经丝纤维。由于直接的创伤或者缓慢的退化过程,受损的神经细胞内容物释放至周边的隔室,所以可以定量检测轴突蛋白。升高的神经丝轻链水平已发现在各类退行性疾病中,例如肌萎缩性[脊髓]侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化和在动物模型中的慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎。
  神经丝轻链蛋白检测试剂盒利用ELISA夹心法原理。一种特异性单克隆抗体包被在固相表面并连接神经丝。通过使用另一种酶标记的单克隆抗体进行检测。通过酶促反应使无色的底物液转化为有色产物,颜色的强度与样本中神经丝含量成正比。
  神经丝轻链蛋白(NF-light)检测步骤
  注意:酶标板每次洗涤后应在吸水纸上拍干。板子放在800rpm的定轨振荡器上振荡是很重要的
  1、使用样本稀释缓冲液按1:1稀释CSF样本,得到总体积小为210?l(做双孔时所需的量)。
  根据标准品稀释表,进行标准品的重溶和稀释。
  2、使用洗涤缓冲液洗涤包被板(3次,每次300/l)。加入的洗涤液应吸出或者通过在吸水纸上拍干清除。
  3、 加入准备好标准品、样本各100/l,进行双孔检测。于振荡器(800 rpm)中室温(20-25)下温育1小时。
  4、使用洗涤缓冲液洗涤包被板(3次,每次300/l),见步骤2。
  5、每孔加入100?l新鲜配制的标记物(生物素化的抗NFL 抗体)。于振荡器(800 rpm)中室温(20-25)下温育45分钟。
  6、使用洗涤缓冲液洗涤包被板(3次,每次300/l),见步骤2。
  7、每孔加入100/l新鲜配制酶联物(HRP标记的链霉亲和素)。于振荡器(800 rpm)中室温(20-25)下温育30分钟。
  8、使用洗涤缓冲液洗涤包被板(3次,每次300/l),见步骤2。
  9、每孔加入100/l TMB。于振荡器(800 rpm)中室温(20-25)下温育15分钟。
  10、每孔加入50/l的终止液,并在450nm处(参考波长620-650 nm)读数。注意:终止液含稀释的硫酸具有腐蚀性。神经丝轻链蛋白(NF-light)
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