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浅析ELISA检测试剂盒的运用注意事项和操作程序
  一:运用注意事项
  1.  ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2. 浓洗刷液也许会有结晶分出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗刷时不影响效果。
  3. 严峻按说明书的操作进行,试验效果断定有必要以酶标仪读数为准。
  4. 本试剂不一样批号组分不得混用。
  5. 封板膜只限一次性运用,以避免交叉污染。
  6. 全部样品,洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。
  7. 底物请避光保存。
  二:操作程序
  1. ELISA检测试剂盒分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品后稀释度为5倍)。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。
  2. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
  3. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  4. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  5. 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  6. 根据ELISA检测试剂盒免费代测标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
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