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儿茶酚胺检测试剂盒操作流程是怎样的?
   儿茶酚胺检测试剂盒是重点实验室为科研研究的*品5-羟色胺ELISA检测试剂盒,在生物分子领域得到长足的发展及火爆的人气。儿茶酚胺检测试剂盒可以根据实验的需求与目的来计算曲线,每次实验的标准曲线一般设7个不同浓度,加上空白孔,标准曲线一共需要8个孔。因此,一个48T试剂盒最多可以测定40个样本(不做重复且一次用完),一个96T试剂盒最多可以测定88个样本(不做重复且一次用完)。
  操作流程如下:
  1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  2酶标板置4℃,包被过夜。
  3洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  4阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
  5酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  6洗板,同4。
  7每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
  8酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  9洗板,同4。
  10每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  11每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
  12分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  13数据处理:在得出标本s和阴性对照n的 od值后,计算s/n值。s/n***2.1为阳性判定标准。
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