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人生长激素ELISA的操作步骤
  在保证ELISA有效检测病原菌的前提下,快速、方便也是人生长激素ELISA的必要条件。人生长激素ELISA从加入待测抗原到得出结果,检测大肠杆菌O157:H7共需要5h左右,而间接ELISA则需要7h(包被37℃,2h)或者17h(包被4℃guo夜)。本论文筛选出的人生长激素ELISA检测大肠杆菌O157:H7省去封闭这一步骤。在间接ELISA测定抗原中,封闭一般是bi不可少的,因为包被不同浓度抗原不一定可以wan全覆盖固相载体表面,如果不封闭,很可能使随后加入的特异性抗体和酶标二抗直接被吸附到固相载体上,产生非特异性显色而使检测结果偏高。但是对于双抗体夹心ELISA来说,在包被捕获抗体时已经使固相载体饱和,已经没有多余的吸附力来吸附随后加入的特异性抗体和酶标二抗,这都说明了人生长激素ELISA有不需要封闭的可能,通过正交试验结果也证明不封闭可以达到理想实验效果,而且还缩短了整个检测流程和时间,说明只要酶标记物是高活性的并且操作时洗涤che底,不经封闭也可得到满意结果。人生长激素ELISA检测法的特异性和灵敏性抗原抗体的结合实际上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间,由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原抗体反应具有高度的特异性。但这种特异性并不是的,假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗体反应中可能出现交叉反应。本实验以大肠杆菌O157:H7及其他菌株共10株作为抗原用来检测本方法的特异性,结果显示大肠杆菌O157:H7呈明显阳性反应,其余各菌株均呈阴性反应,说明本方法对大肠杆菌O157:H7具有明显的检测特异性,而对所测定的其它菌株无交叉反应。
  人生长激素ELISA操作步骤
  ⑴将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。
  ⑵加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
  ⑶加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
  ⑷加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
  根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
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