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德国IBL 腺病毒 IgM ELISA试剂盒
腺病毒 IgM ELISA试剂盒
(德国IBL:RE56581)
德国IBL中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 
1、应用范围
此酶免试剂盒可用于人血清和血浆中抗腺病毒IgM抗体的定性和定量检测。
2、前言说明
腺病毒是人和动物体内普遍存在的一种病原体,可分为许不同的血清型。腺病毒是一种常年存在所有人群中的地方性疾病。 这种传染病可以通过空气传播,也可通过尘埃传播。腺病毒主要感染呼吸道黏膜和肠道黏膜,也会感染角膜。它们主要集中于上皮细胞和局部附属淋巴结。腺病毒可 引起各种已知的呼吸道病毒性疾病:呼吸道疾病、肺炎、与游泳池相关的咽结膜炎高烧和角膜结膜炎流行病。腺病毒的肠内感染主要出现在小于一岁的小孩中。它主 要特点是出现流行性急性肠胃炎,通常是由腺病毒40和41引起的。分离腺病毒或血清学检测可以检测是否急性腺病毒感染。腺病毒的血清学检测特别重要,因为 它可确定病人是否是急性腺病毒感染,另外它也用于大型流行病学的调查研究。ELISA主要测抗六联体成分上群特异性决定簇的抗体。建议用于检测特异性抗体 的检测方法有:血凝抑制和血清中和实验。由于腺病毒到处都存在以及相关血清型之间的交叉反应,为了确定感染,可使抗体浓度提高4倍或更高的血清转化就很有 必要了。在血清学检测中,IgG是主要被检测的抗体。
3、实验原理
此固相ELISA试剂盒利用的是夹心法。包被孔中包被了抗原。用对IgM具有特异性的酶标二抗来检测结合到包被抗原上的样品特异性抗原。底物反应后,所显示的颜色强度与IgM特异性抗体的浓度成正比。样品的结果可直接用标准曲线获得。
4试剂盒组成:
4×2ml
标准品A-D
1;10;40;150U/mL,待用
标准品A=阴性质控           标准品B=临界质控
标准品C=弱阳性质控         标准品D=阳性质控
内含抗腺病毒的IgM抗体,PBS(磷酸缓冲液),稳定剂。
1×14ml
酶标IgM
红色,待用。内含过氧酶标记的抗人IgM,蛋白缓冲液,稳定剂。
1×12×8
包被板
可拆,包被有特异性抗原。
1×14ml
TMB底物液
含TMB
1×14ml
TMB终止液
0.5M的H2SO4
1×60ml
稀释液
含PBS缓冲液,<0.1%NaN3
1×60ml
浓缩洗涤液
浓缩型(10×),含PBS缓冲液,吐温20
粘性金属板
用于在温育时遮盖包被板
塑料袋
用于储存不用的板条
5、实验所需材料但试剂盒不提供
1)       RF吸附剂
2)       移液器,体积:5;50;100;500 µL
3)       校准仪
4)       样品稀释用试管(1ml)
5)       带试剂储器8道移液器
6)       洗涤瓶,自动或半自动洗板机
7)       能在450nm处读数的酶标仪
8)       双蒸水或去离子水
9)       吸水纸,取样吸头和计时器
6、实验前的准备说明
6.1成分准备
稀释/溶解
成分
 
稀释液
比例
备注
贮存
稳定性
60ml
洗涤液
加600ml
双蒸水
1:10
加热至37°C以溶解结晶,充分混合
2-8°C
 
8周
6.2样品稀释
样品
稀释
稀释液
比例
备注
血清/血浆
全部稀释
稀释缓冲液
1:101
例:5µL+500µL
6.3用RF吸附剂处理:
注意
为了避免特异性IgG和类风湿因子的干扰,病人的血清应当用RF吸附剂处理(RE59059)。
标准品和质控品千万不要用RF吸附剂处理。
1.
在400µL按1:101的比例稀释的样品中加入20µL RF吸附剂。充分混合。
2.
室温(18-25℃)下温育≥1min(<15min)
为了避免吸附特异性抗体,应当避免温育时间>15min。
预处理的样品可能会是浑浊的。
7、实验步骤:
1)       加100µL标准品、质控品或已稀释样本于相应反应孔中,在定性检测中只使用标准品B。
2)       封板后室温(18℃-25℃)温育60分钟。
3)       移去粘性金属板,弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干。
4)       在每一微孔中加入100µL酶联物。
5)       封板后室温(18℃-25℃)温育30分钟。
6)       移去粘性金属板,弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时,如果有条件的话,可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。
7)       每孔加TMB底物液100µL。
8)       室温(18℃-25℃)避光温育20分钟。
9)       在每一微孔中加入100µLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动包被板以使试剂混合均匀。此时,颜色蓝色变成黄色。
10)    加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
8、结果计算
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法,以标准品的OD值为Y轴,浓度为X轴,绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对 数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图,用标准品的每一单值进行计算(样品结果明显异常的值必须删除掉,应使用更加合理的单值)。样 品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了,就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于zui高标准,则应根据实验前的准备说明所述对样品进 行稀释,并重新检测。
9、结果判定: > 12 U/ml  为阳性,8 - 12 U/ml  为可疑,< 8 U/ml  为阴性
此检测结果并不是任何治疗结果判定的*因素,它应当结合临床观察和诊断结果加以判断。
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
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