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基孔肯雅热IgM ELISA试剂盒说明书
基孔肯雅热IgM ELISA试剂盒说明书
德国IBL进口原装:RE58841)
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【预期用途】
基孔肯雅IgM抗体ELISA检测试剂盒主要用于定性检测人血清和血浆中抗基孔肯雅病毒的IgM抗体。
【实验原理】
此试剂盒基于ELISA技术。包被板中包被了抗人IgM抗体,如果人血清或血浆中含有IgM时,则会与其特异性结合,洗板将未结合的物质洗去, 然后加入基孔肯雅抗原溶液,洗板洗去未结合的物质,然后加入链霉亲和素和基孔肯雅抗体酶联物。洗板后,加入TMB底物液,颜色变成蓝色,加入终止液终止反 应,颜色由蓝色转为黄色,zui后用酶标仪在450nm处读数。
【试剂组成】
包被板:12×8可拆卸,包被了抗人IgM抗体,密封在可重封铝箔袋中
基孔肯雅溶液1:1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液,即用,白盖
基孔肯雅溶液21瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗体,即用,蓝色,白盖
基孔肯雅IgM阳性质控:1瓶,1.5mL,黄色,即用,红盖
基孔肯雅IgM临界质控:1瓶, 2mL,黄色,即用,绿盖
基孔肯雅IgM阴性质控:1瓶,1.5mL,黄色,即用,蓝盖
样本稀释液: 1瓶包含100mL的即用缓冲液,用于稀释样本,pH7.2±0.2,黄色,白盖
洗涤液:1瓶,包含50mL  20倍浓缩的缓冲液,(pH7.2±0.2)用于洗板,白盖
链霉亲和素结合液:1瓶包含6mL过氧化物酶结合的链霉亲和素,即用,红色,黑盖
TMB底物液:1瓶包含15mL  TMB,即用,黄盖
终止液:1瓶包含15mL,即用,内含硫酸,0.2mol/l,红盖
 
【需要的设备和材料】
             固定板
             封板片
             酶标仪(450/620nm)
             37℃孵箱
             洗瓶或自动洗板机
             10~1000μL的移液器
             漩涡混匀器
             蒸馏水或去离子水
             一次性试管
             计时器
【储存和稳定性】
试剂在有效期内,储存于2-8℃稳定
【试剂准备】
洗涤液的准备
用双蒸水稀释洗涤液,例子:10ml洗涤液+190ml双蒸水。稀释好的洗涤液在室温下5天内有效。
【样本的采集和准备】
这个实验中使用的样本是人血清和血浆,如果实验在样本采集后的5天内进行,则需要储存在2-8℃,否则,必须于-20℃到-70℃深度冻存。如果样本是深度冻存的,在使用前,则需要充分混匀,避免反复冻融。
不推荐使用热灭活的样本
【样本的稀释】
将10μL样本跟1ml的样本稀释液混匀,并用漩涡混匀器充分混匀。
【实验步骤】
在开始试验前,请仔细阅读试验说明。结果的可信度是依赖于严格地按照实验说明来进行的,铺板时zui少留1个孔为空白对照(A1)1个阴性质控孔(B1)2个临界质控孔(C1+D1)1个阳性质控孔(E1)。开始试验前,请将所有试剂都平衡到室温
1.         吸取50μL的质控品和稀释过的样本到相应的孔中,留A1孔做空白对照孔
2.         封板
3.         在37±1℃下孵育1小时±5分钟
4.         当孵育完成时,揭去封板片,弃去反应液,每孔300μL洗涤液,洗板3次,避免溢出。每孔浸泡的时间都必须>5秒,zui后拍板将残留的液滴都拍去。
5.         吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白对照孔的每个孔中,盖板
6.         在室温孵育30分钟
7.         重复步骤4
8.         将基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素结合物混匀10分钟
9.         吸取50μL基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素的复合物到除了空白对照孔的每个孔中,盖板。
10.     室温孵育30分钟
11.     重复步骤4
12.     吸取100μL  TMB底物液到每个孔中
13.     避光孵育15分钟()
14.     加入100μL终止液到每个孔中,与加TMB底物液时的间隔和顺序都必须一样
15.     用酶标仪在加入终止液后30分钟内与450/620nm处检测
【检测】
调整酶标仪,以空白对照孔调零,以450nm处检测所有孔的吸光度值。
【结果】
1.         检测生效的条件
只有以下条件符合,检测的结果才能认为的有效的
  空白对照孔             吸光度值<0.100
  阴性质控孔             吸光度值<临界质控
  临界质控孔             吸光度值0.150-1.300
  阳性质控孔             吸光度值>临界质控
如果以上条件不符合的,那么试验结果则是无效的,需要重新检测
2.         结果的计算
临界质控平均吸光度值的计算,例子:吸光度1:0.39;吸光度2:0.37
                                  (0.39+0.37)/2=0.38
                                 平均吸光度值为0.38
3.         结果的说明
样本如果是比临界值高出10%,则认定为阳性,
样本如果是在临界值上下10%之内,则认定为灰色区(推荐在2-4周之后再次检测新鲜的样本,如果样本仍然是灰色区,可以直接认为是阴性)
样本如果是比临界值低出10%,则认定为阴性
4.         结果的单位
病人样本平均吸光度值×10     = U
   临界值
 
 
例子: 1.216×10    =32U
0.38
临界值: 10   U
灰色区:9-11   U
阴性:   <9   U
阳性:   >11  U
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
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