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DRG 细小病毒B19 IgM ELISA试剂盒

DRG 细小病毒B19 IgM ELISA试剂盒
(德国DRG*,货号:EIA3504)
德国DRG中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务

 
 
1、说明
DRG公司的吸小病毒B19 IgM酶免试剂盒可用于人血清中抗细小病毒B19 IgM抗体的定性和定量检测。此试剂盒仅供体外诊断用,在美国,此试剂盒仅供研究用。
2、实验原理
DRG公司的细小病毒B19 IgM ELISA试剂盒是一种固相的酶联免疫吸附实验,包被板的微孔中包被了重组的细小病毒B19抗原)。将稀释好的病人样品和即用型的质控品加入到微孔中,温育期间,阳性样品和质控品中的细小病毒B19特异性抗体会结合到固相抗原上。洗板除去未结合的样品,再微孔中加入辣根过氧酶标记的抗人IgM抗体。在第二次温育中,IgG酶联物会结合到这些特异性的IgM抗体上而产生酶联免疫复合物。第二次洗板除去未结合的酶联免疫复合物。加入TMB底物液后,溶液显示蓝色。之后加入终止液终止酶促反应,此时容易由蓝色变成黄色。溶液所显示的颜色强度与样品中细小病毒B19特异性IgM抗体的浓度成反比,450nm处读取OD值。
3、试剂盒成分
 

  • 包被板:12*8(可拆),96孔,微孔中包被了重组的细小病毒B19抗原(VP1蛋白)
  • 样品稀释液:1支,100ml,即用,黄色,pH7.2±0.2
  • 阳性质控,1支,2.0ml,即用,黄色,红盖
  • 阴性质控,1支,2.0ml,即用,黄色,黄盖
  • 临界质控,1支,2.0ml,即用,黄色,黑盖
  • 酶联物,1支,20ml,即用,红色,内含辣根过氧酶标记的抗人IgM
  • 底物液,1支,14ml,即用,内含TMB底物液
  • 终止液,1支,14ml,即用,内含0.5mol/L的H2SO4,避免接触终止液,以免刺激或着烧皮肤。
  • 洗涤液,1支,30ml(40倍浓缩,可稀释到1200m),pH7.2±0.2

4、样品
此实验中将用到血清,不能使用溶血、黄疸血或脂血样品。
 

  1. 样品的采集,血清,静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下用离心机分离血清。未完全凝血前请勿离心,接受了抗凝剂治疗的病人样品可能需要更长的凝血时间。
  2. 样品的储存:必须盖住样本并在实验之前于2-8℃下可贮存至24小时。样品需要更长的贮存时间,必须在实验之前于-20℃下一次性冻存。融化的样本在检测之前必须要上下倒置几次。
  3. 样品的稀释:实验开始前,用零标准品按1:100的比例稀释样品。10μL样品+1ml样品稀释液,混合,静置15分钟,混合均匀。注意:质控品是即用型的,不必稀释。

5、实验步骤
实验开始前,按照稀释步骤稀释好洗涤液,准备好样品,确定样品和标准品的数量。
 

  1. 将所需数目的板条置于板架上,实验至少做以下几孔。

1孔(如A1孔),用来做空白孔
1孔(如B1孔),用来做阴性质控
2孔(如C1+D1),用来做临界质控
1孔(如E1),用来做阳性质控
用户自己决定质控品和样品是否做双孔。
 

  1. 在所有的微孔中加入洗涤液,浸泡5分钟。弃取孔内反应液,吸水纸上拍干以除去残余液体。
  2. 在B1孔内加入100ul阴性质控,

在C1和D1孔内分别加入100ul临界质控
在E1孔内加入100ul阳性质控
在相应的样品孔内分别加入100ul稀释好的样品,A1空白孔不用加。
 

  1. 盖板,室温温育(22-25℃)60分钟。
  2. 弃去孔内的反应液。用稀释好的洗涤液洗板3次(每孔300ul),在吸水纸上把板拍干以除去残余液体。注意:洗板步骤是否正确会明显影响实验的灵敏度和精密度。
  3. 加100μl的酶联物于各孔中,除A1孔。
  4. 盖板,室温温育(22-25℃)30分钟。
  5. 弃去孔内的反应液。用稀释好的洗涤液洗板3次(每孔300ul),在吸水纸上把板拍干以除去残余液体。注意:洗板步骤是否正确会明显影响实验的灵敏度和精密度。
  6. 每孔加100μl底物液。
  7. 盖板,室温避光温育(22-25℃)15分钟。
  8. 每孔加100μl终止液,溶液由蓝色变成黄色。
  9. 加终止液后30分钟内在450nm波长读取OD值。

6、实验的有效性
如果实验能满足如下标准则认为实验有效:
空白孔A1:OD值低于0.100
阴性质控B2孔:OD值低于0.200
临界质控(CO)C1/D1:OD值在0.250-0.600之间
阳性质控E1孔:OD值必须大于临界质控
7、结果计算
临界质控平均吸光度值(CO)
计算两个临界质控的平均OD值,如(0.44+0.45)/2=0.445=CO
8、结果说明
阳性:病人样品的平均OD值比临界OD值高20%以上的样品,(病人样品OD>1.2倍CO)
灰区:病人样品的平均OD值在120%CO和90%CO范围内的样品,(0.9倍CO≤人样品OD≤1.2倍CO=。将灰区样品重新检测,如果样品OD仍位于灰区,则样品为阴性样品。
阴性:病人样品的平均OD值比临界OD值低10%以上的样品,(人样品OD<0.9倍CO=。
 
结果按DRG单位计算(DU)
病人样品平均OD值*10/CO=DU(DRG 单位)
例如:1.580*10/0.445=35DU
结果说明:
临界值:10DU
灰区:9-12DU
阴性:<9DU
阳性:>12DU
 
 
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
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