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大鼠白介素1β ELISA试剂盒

小鼠白介素-6ELISA检测试剂盒
日本IBL进口原装   货号:27768   规格:96T
日本IBL中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 

前言简介
白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6,骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用.
此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血清和细胞基质上清的白介素6
原理
此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比.
 
检测范围
10.94 ~700 pg/mL
 
预期用途
 
■此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测
 
 
试剂盒成分
1  预包被板:     抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化                96T
2  酶标记抗体:
   (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化         0.4mL x 1
3  标准品:           重组小鼠白介素-6                        0.5mL x 2     
4  EIA缓冲液:         含1% BSA, 0.05%吐温20  BPS                       30mL x 1
5  标记抗体稀释液:       含1% BSA, 0.05%吐温20  BPS                  12mL x 1
6  显色剂:                                 TMB底物液                                                15mL x 1
7  终止液:                                     1N硫酸                                                   12mL x 1
8  浓缩洗涤液:
 (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20  BPS                      50mL x 1
 
 
操作说明
1实验所需器材但试剂盒没有提供
  酶标仪(450nm)           微移液管及其吸嘴
  量筒及烧杯             去离子水
  冰箱(4°C)               坐标纸(log/log)
  吸水纸                 试管(用于标准品稀释)
  温育箱(37°C ± 1°C)
  洗瓶(用于洗板)
  一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
2准备
 

  1. 洗涤液的准备

试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL去离子水稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周.
 

  1. 酶标记抗体的准备

试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍.
示例:
如果你用一条板(8孔),就需800  μL.的标记抗体.就用870  μL的标记抗体稀释液稀释30  μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL
浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验
剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C
 

  1. 标准品的准备

0.5 mL的去离子水到瓶装标准品,制成浓度为1,400 pg/mL小鼠白介素-6标准品液
 

  1. 标准品的稀释

准备8支试管,并每支各加230 μL  EIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:
试管1                            700 pg/mL
试管2                            350 pg/mL
试管3                                              175 pg/ mL
试管4                                              87.5 pg/mL
试管5                                             43.75 pg/mL
试管6                                             21.88 pg/mL
试管7                                              10.94pg/mL
试管8                                   0 pg/mL(样品空白对照)
吸取230ul的标准品液于1号管混匀,然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀,如下图所示,按此规律稀释,系列标准品浓度范围为10.94-700 pg/mL,第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照

 
 

  1. 样品稀释

 样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释
 如果样品中小鼠白介素-6的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释浓度的样品液来确定zui佳的检测浓度.
 
 
 
 
3实验步骤
使用前,将所有试剂应平衡至室温,大约30min,充分混匀,确保试剂质量无改变,标准曲线和样品检测必须同时进行.
 
 
 

试剂 待检测样品 标准品 样品空白 试剂空白
检测样品100ul 稀释标准品(1-7管)100ul EIA缓冲液(第8管)100ul EIA缓冲液100ul
盖板,于4°C下温育过夜
洗板7次
酶标抗体 100ul 100ul 100ul -
盖板,于4°C下温育30min
洗板9次
显色剂 100ul 100ul 100ul 100ul
室温避光温育30min
终止液 100ul 100ul 100ul 100ul
加终止液后,30min内于450nm处读取OD值
 

1)设试剂空白对照,并于相应的微孔中加入100ul EIA缓冲液
2)  确定好样品空白对照孔,检测样品孔和标准品孔,分别将100ul样品对照品(8号管)、检测样品和稀释好的标准品(1-7号管)加入到相应的微孔中。
3)盖板,4°C下温育过夜
4)用洗涤瓶剧烈洗板,再加入稀释洗涤液,静置15-30秒,再彻底倒去孔内反应液
重复洗板7.
zui后在吸水纸上拍干,去除残留液滴
如用自动洗板机洗板,先自动洗4,再按上述用洗瓶手工洗3
5)除试剂空白对照孔外,其余每孔各加100ul酶标抗体
6)盖板,4°C下温育30min
7)按照上述步骤4)洗板9次
8)  用一次性试管取所需量的显色剂,各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染,勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中
9)室温避光温育30min,加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色
10)每孔各加100ul终止液,溶液颜色会变成黄色
11)擦去微孔板底部的污迹或水滴,确保微孔内溶液无气泡产生.加入终止液后30min内于酶标仪450nm处读取结果
 
 
特别注意
 

  1. 收集样品后即尽快检测. 如需保存, 冻存样品,但要避免反复冻融.检测前,将样品解冻至室温
  2. 如样品需稀释,用EIA缓冲液稀释
  3. 样品和标准品建议做双份检测
  4. 保持样品处于中性PH范围.有机溶剂的污染会影响实验结果
  5. 只能用本试剂盒提供的洗涤液洗板.不充足的洗板会导致错误的结果
  6. 在吸水纸上拍干去除残留液滴时,切勿用吸水纸刮擦孔内壁
  7. 显示剂应避光保存并避免与金属物质接触
  8. 加终止液后,30 min内就应读取实验结果

 
结果计算
所有实验数据(包括标准品,检测样品的OD值),都应减去样品空白对照的OD值.
在log-log坐标纸用,以较正的OD值为纵坐标,相对应的浓度为横坐标,建立标准曲线. 样品直接在标准曲线上获取浓度值.
标准曲线示范

 
上图所示典型标准曲线仅用于演示示范,不能用于试验数据的获取.每次实验都应建立其标准曲线.
 
使用及处理常规事项
1所有试剂置于2 - 8°C保存.实验前将试剂平衡至室温(约30分钟)
2瓶装标准品是冻干品,故小心打开瓶盖
3终止液是强酸物质.使用时,避免其接触皮肤和衣肤
4弃置用过的物质前,用水冲洗
5 浓缩酶标抗体,EIA缓冲液和浓缩洗涤液可能会出现沉淀,但这并不会影响实验
6使用试剂后应洗手
7切勿混用不同批号的试剂
8别使用过期的试剂
9试剂盒仅供研究用,不能用于临床诊断
 
存储与有效期
存储条件:2 - 8°C
有效期见试剂盒外包装
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
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