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细菌基因组DNA纯化试剂盒

点击次数:495 发布时间:2009/12/22
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本公司新推出的全新细菌基因组纯化试剂盒,操作简便,纯化量大,可纯化革兰氏阳性和阴性菌的基因组DNA。

细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明
 
本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取,由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。整个提取过程不超过45分钟。提取过程包括:1菌液离心,重悬。2裂解菌体,释放基因组DNA3盐析沉淀蛋白,分离DNA4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。5  70%乙醇清洗,晾干并用DNA溶解液溶解。本试剂盒采用复合裂解液,其中含有抑制DNA酶的成分,在加热(65°C)状态下,可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放,本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时,罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。
 
一、      试剂盒组成(本试剂盒提供的组份, 至少可提取1001-5ml菌液基因组DNA的纯化,每种组份均有足够的富余量)
1.   复合裂解液:30ml´1瓶。
2.   蛋白沉淀液:300ml´1瓶。
3.   DNA溶解液:20ml´1瓶。
4.   操作说明书一份。
二、    本试剂盒未提供,须用户自备的试剂为:异丙醇,70%乙醇(国产分析纯)。
 
三、   提取操作:
 
1.     菌液离心:取革兰氏阴性菌菌液1-2ml;或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml1000rpm离心1分钟。
2.     加入细菌重悬液100ul,震荡使菌体重悬。
3.     将复合裂解液置65°C水浴加热,使结晶成分溶解,每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。
4.     混璇器震荡混匀10秒,置65°C水浴中反应10分钟(革兰氏阴性菌),20分钟(革兰氏阳性菌)。
5.     各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下颠倒5-6次使两者混匀。
6.     13000-16000×g, 离心3-5分钟。
7.   将上清液转移至新的离心管中(注意:由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分,离心后会出现细胞成分上浮的情况,此时取漂浮层下的均一透明液体),加入等体积异丙醇,此时可见透明的絮状物,混匀后离心,同步骤5,吸去上清。
8.   离心管中加入200ul70%的乙醇溶液,来回倒置,清洗管壁,离心同上。
9.   移去70%乙醇,倒置离心管于干净的滤纸上,自然干燥10-15分钟,加入DNA溶解液100ul
10.快速漩涡震荡1-2秒,使DNA溶解液冲刷到所有沉淀的DNA
11.将纯化的全血基因组置65ºC水浴1小时,或4ºC过夜使DNA充分溶解(要求不严格的PCR试验可缩短时间或省去该步),轻轻弹动管壁有助于溶解基因组DNA可直接进行PCR等下一步操作。
四、注意事项:
1.        用户可选择使用RNase A, 使用方法为:在第3步完成后1.5ul RNase A, 混匀后,37ºC孵育15分钟,冷却至室温。(RNase A的配法:将RNase A溶于TE buffer中,浓度为4mg/ml, 煮沸10分钟,以去除DNase, 分装后-20ºC保存;也可购买配好的试剂使用。
2.        革兰氏阳性菌由于细胞壁的存在,纯化的量较阴性菌要少一倍以上。
3.        提取得DNA样本在70%乙醇中,存于-80ºC,可长期保存。
五、储存条件:本试剂盒在室温条件下可保存一年。
 

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