本公司新推出的全新细菌基因组纯化试剂盒，操作简便，纯化量大，可纯化革兰氏阳性和阴性菌的基因组DNA。 细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明 本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取，由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。整个提取过程不超过45分钟。提取过程包括：1菌液离心，重悬。2裂解菌体，释放基因组DNA。3盐析沉淀蛋白，分离DNA。4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解。本试剂盒采用复合裂解液，其中含有抑制DNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放，本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。 一、 试剂盒组成（本试剂盒提供的组份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因组DNA的纯化，每种组份均有足够的富余量） 1． 复合裂解液：30ml´1瓶。 2． 蛋白沉淀液：300ml´1瓶。 3． DNA溶解液：20ml´1瓶。 4． 操作说明书一份。 二、 本试剂盒未提供，须用户自备的试剂为：异丙醇，70%乙醇（国产分析纯）。 三、 提取操作： 1． 菌液离心：取革兰氏阴性菌菌液1-2ml；或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml，1000rpm离心1分钟。 2． 加入细菌重悬液100ul，震荡使菌体重悬。 3． 将复合裂解液置65°C水浴加热，使结晶成分溶解，每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。 4． 混璇器震荡混匀10秒，置65°C水浴中反应10分钟（革兰氏阴性菌），20分钟（革兰氏阳性菌）。 5． 各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下颠倒5-6次使两者混匀。 6． 13000-16000×g, 离心3-5分钟。 7． 将上清液转移至新的离心管中（注意：由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分，离心后会出现细胞成分上浮的情况，此时取漂浮层下的均一透明液体），加入等体积异丙醇，此时可见透明的絮状物，混匀后离心，同步骤5，吸去上清。 8． 离心管中加入200ul，70%的乙醇溶液，来回倒置，清洗管壁，离心同上。 9． 移去70%乙醇，倒置离心管于干净的滤纸上，自然干燥10-15分钟，加入DNA溶解液100ul。 10．快速漩涡震荡1-2秒，使DNA溶解液冲刷到所有沉淀的DNA。 11．将纯化的全血基因组置65ºC水浴1小时，或4ºC过夜使DNA充分溶解（要求不严格的PCR试验可缩短时间或省去该步），轻轻弹动管壁有助于溶解基因组DNA可直接进行PCR等下一步操作。 四、注意事项： 1. 用户可选择使用RNase A, 使用方法为：在第3步完成后1.5ul RNase A, 混匀后，37ºC孵育15分钟，冷却至室温。（RNase A的配法：将RNase A溶于TE buffer中，浓度为4mg/ml, 煮沸10分钟，以去除DNase, 分装后-20ºC保存；也可购买配好的试剂使用。） 2. 革兰氏阳性菌由于细胞壁的存在，纯化的量较阴性菌要少一倍以上。 3. 提取得DNA样本在70%乙醇中，存于-80ºC，可长期保存。 五、储存条件：本试剂盒在室温条件下可保存一年。 |
