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多巴胺试剂盒检测步骤都有哪些?
   多巴胺试剂盒可用于人血浆和尿液中多巴胺的体外定量检测,可手动操作,也可自动操作。进一步的研究表明:此试剂盒还可用于组织匀浆和细胞培养上清液的研究。
  多巴胺试剂盒检测步骤
  1、在一次性试管内,用释放缓冲液以1:51的比例稀释提取的标准品,质控品和尿液样本(如:10ul提取样本+500ul的释放缓冲液)
  2、在包被板的每一微孔中加入75μL刚配置好的COMT酶溶液,轻轻振荡。
  3、将预稀释的标准品,质控品和尿液样本加100ul至相应孔内血浆样本直接加100ul于相应孔内在此步骤中,将枪头直接触碰COMT酶溶液,颜色会转为粉红色,轻轻混匀。
  4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。
  5、盖板。在振荡器(400-600rpm)上18-25℃的环境下温育120min
  6、弃去孔内反应液,每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。
  7、每孔加入100μL酶联物
  8、盖板。在轨道摇床(400-600rpm)上18-25℃的环境下温育60min
  9、弃去孔内反应液,用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。
  10、加底物液和终止液时,其时间间隔应相同
  11、每孔加入200μL底物液
  12、在轨道摇床(400-600rpm)上18-25℃的环境下温育40min。如果自动操作时的温度超过25℃时,则应相应的将温育时间缩短至30min。
  13、每孔加入50μL PNPP终止液以终止底物反应,轻轻振荡包被板以充分混合试剂成分。
  14、加终止液后60min之内405nm处读取OD值。(参考波长:620-650nm)
  多巴胺试剂盒实验标本采集必修课:
  1)标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  2)血清:使用不含热原的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  3)血浆:3000转离心30分钟取上清。
  4)细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  5)组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎,3000转离心10分钟取上清。
  6)保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  多巴胺试剂盒不做任何有损顾客利益的事情,经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,优秀的科研队伍,先进的实验设备、准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴,优惠促销质量有保证,带给您Z满意的实验效果。
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