乙脑IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

（德国DRG  EIA4518）

【产品名称】

通用名称：乙脑IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Japanese Encephalitis IgG ELISA

【产品规格】

96T

【预期用途】

该试剂盒在人血清中检测JEV（日本乙脑病毒）衍生的重组抗原（JERA）（1-4）的抗体IgG。该试剂盒有助于诊断人是否感染了JEV。此试剂盒并不用于血液或血液成分的筛查，该试剂盒目前并没有用于疫苗优化中的血清型研究。

【实验原理】

JE IgG酶联免疫吸附试剂盒是酶促放大的“两步”法夹心酶免检测试剂。

在实验中，JE IgG阳性质控（代表着活性或者可疑活性的血清）、JE阴性质控（代表着非活性的血清）与未知的样本血清在微孔板上孵育。血清样品用IgG样品稀释缓冲液进行稀释。经温育和洗涤，包被孔加入辣根过氧化物酶标记的抗人特异性IgG。经第二次的温育和洗涤步骤，然后加入TMB底物液温育。加终止液，酶标仪上检测。当高于一定值时，JERA和质控品的吸光值比可准确地测定JEV抗体是否存在。

【试剂盒组成】

检测日本脑炎IgG酶联诊断试剂盒包含了够96孔（12×8板条）反应检测所需的试剂，试剂盒主要有下列试剂：

检测日本脑炎IgG的特定材料

1. 包被板：板架，96孔聚苯乙稀微孔板包被了单克隆抗体连结的重组JERA（A、B、C、D行）和质控抗原NCA（E、F、G、H行），在2-8℃下储存，即用型。
2. 样品稀释缓冲液：两瓶，25ml ，用于血清样本稀释；2-8℃下贮存，即用。
3. 日本脑炎病毒（JE） IgG 阳性质控：一瓶，50μL。该阳性质控也可以用来监控试剂盒的完整性。保存在2-8℃，即用型。
4. JE阴性质控：一瓶，50μL。该阴性质控可以用来监控试剂盒的完整性。保存在2-8℃，即用型。
5. 酶联物：一瓶，6ml，预稀释的HRP标记的羊抗人IgG，在下面的过程使用。保存在2-8℃，即用型。

注意：该酶联物需要一直盛在避光瓶中，如所提供的瓶子。

6. 10倍浓缩洗涤液：1瓶, 120ml，内含洗涤步骤中将使用到的洗涤缓冲液，2-8℃下贮存备用。

7．Enwash：1瓶，20ml，Enwash在加酶联物后和在洗板前使用，在2-8℃下贮存，即用型。

1. TMB底物液：1瓶，9ml，在2-8℃下贮存，即用型。

注意：底物液应时刻存放于试剂盒所提供的避光瓶里。

9. 终止液：1瓶6ml，用来终止酶反应，2-8℃下贮存，即用型。

警告：含强酸；穿保护手套、面罩和戴安全眼镜，弃置所有材料均应按照安全条例与规则进行。

实验所需材料但试剂盒未提供

• 能够在450mn处测定吸光度的酶标仪
• 生物学的或高纯度水
• 真空泵、洗板机
• 37℃孵箱
• 1-10μl单通道的移液器，50-200μl单通道及多通道的移液器

【样本采集和制备】

1. 在本实验中必须使用人的血清，全血或血浆不能直接测定
2. 为避免溶血，应尽快将血清从凝血中分离。
3. 在收集（样品）后应尽快开始实验。不要让血清在室温中放置过长的时间。
4. 使用血清以及遵守静脉采血注意事项。样品在7天内（使用）可贮存于2-8℃,在30天内需在-20℃或更低的温度下冻存。要更长时间的贮存，必需在-70℃冻存，避免反复冻融样品。
5. 冻存的样品须平衡至室温，在使用前轻轻旋转或倒置使其充分混合，通常在使用前迅速旋转。
6. 如果血清需运输，其包装应该符合联邦的传染性病原体运输规定。
7. 一旦发现有（微生物）生长不要使用该血清。

【检测方法】

实验前将所有试剂和样本平衡至室温，使用前轻轻翻转使样本和试剂充分混匀。

注意：

所有血清，包括实验所用，均不能反复冻融，如需长时间贮存，需分装贮存于-70℃，通常在使用前迅速旋转收集了样本的玻璃瓶或者试管。

实验前准备

1.  1X洗涤液准备：用生物学或者高级别的水将10X的洗涤液稀释为1X洗涤液，在120ml 10X的洗涤液中加入1080ml的蒸馏水或去离子水，包括任何结晶, 旋转至充分混合和溶解所有结晶。在稀释至1X后，zui多可在室温下贮存6个月。每次的洗涤为300µL/孔。

注意：使用前检查1X洗涤液是否有沉淀物、微生物生长或者浑浊，不要使用受污染的1X洗涤液。

1. 微孔板：选择试验所需微孔板数，剩余的未使用的反应板条应尽快重新放入包装袋中（含干燥剂）在2-8℃下贮存至使用或至保质期。

实验步骤...................

【质量控制】

每试剂盒中均含有阴性和阳性质控血清。阴性质控和阳性是用于监测试剂的实质性错误，阳性质控并不保证试剂临界值的精确性。如果质控ISR值没有符合说明书的规定，该实验无效和必须重做。这些质控可接受的免疫状态比（ISR）值会在以下的详细表格中说明。质量控制的执行必须与地方的，国家的和或联盟规则要求和你实验的质量控制程序标准相*，建议使用者参照NCCLS C24A和42CFR493.1256作为质量控制实践的指引。以下的结果仅作为例子。

阴性质控的计算：用JERA和质控抗原计算JE阴性质控的平均值................

计算(未知样本的测定):

计算ISR值：计算未知样本的JERA平均值和NCA平均值，然后计算JERA/NCA比率（ISR）。

该IgG 测定中ISR少于2.0，那么应假定阴性。

该IgG 测定中ISR大于5.0，那么应假定阳性。