人骨桥蛋白(OPN)酶免试验试剂盒 (日本IBL 27158) 简介 骨桥蛋白(OPN)来源于骨基质,是一种分泌型糖蛋白。目前已发现多个细胞分泌高酸性的钙结合的糖基化磷蛋白,包括骨细胞,肾小管细胞,巨噬细胞,活化的T细胞和血管平滑肌细胞。分子量的大小取决于其糖基化和磷酸化程度,范围为66~44kDa OPN的一个重要特点是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列,如纤维蛋白,连蛋白和其他胞外蛋白,通过该序列可与细胞表面整合素受体结合,如αvβ3 另一重要特点,由于RNA连接,糖基化,磷酸化,硫酸化和对蛋白酶的敏感度不同,OPN在机体内以多种分子形式存在。OPN和凝血酶同时存在于受伤,炎症,血管再生和肿瘤组织位点。OPN易水解,这一过程可能有着重要的生理学意义。OPN片段的氨基末端含有一个隐藏的结合位点,可识别整合素α9β1,而且OPN还含有多个细胞结合位点,与多个受体反应;这些反应都有着不同的功能 实验原理 此试剂盒根据酶免法的夹心原理,利用两种不同的高特异性抗体,TMB作为着色剂,颜色强度与人OPN的量成正比 两种抗体如下: 包被抗体:抗人OPN(O-17)兔IgG,抗体反应部分,人OPN的N-端标记抗体 HRP标记的抗人OPN(10A16)小鼠IgG Fab’, 抗体反应部分,人OPN凝血酶裂解位点的右侧 检测范围 5~320ng/mL(76.9~4920pg/mL) 预期用途 仅供研究,不能用于诊断 此试剂盒可用于EDTA-血浆,尿液或细胞上清中人OPN的体外定量检测。由于OPN分子是不稳定的蛋白,请在使用前将其储存于-80℃,放置室温或反复冻融会使检测值降低 建议EDTA-血浆样品用EIA缓冲液或PBS5~10倍的稀释,如果5~10倍的稀释还是超出了zui高标准品值,则需进一步稀释 血清或肝素血浆样品的检测结果可能不是正确值,因为OPN不稳定,易被凝血酶裂解,而且OPN分子上有若干个肝素结合位点,所以肝素血浆也会影响试验 建议尿液样品用EIA缓冲液或PBS200倍稀释,但各实验室应*化稀释率。由于尿液样品易分解,建议加入PMSF(蛋白酶抑制剂)等。样品采集后不能立即检测,应贮存于-80℃或更低,避免反复冻融,否则其检测值降低。尿液中OPN的量与尿液的体积成反比,建议用肌酸酐补偿进行检测 细胞上清的稀释比例因细胞而异,各实验室以*化稀释比例稀释 此试剂盒不能检测凝血酶裂解的人OPN 重组的和天然的人OPN都可用此试剂盒检测
试剂盒组成 包被板,96孔,包被有抗人OPN(O-17)兔IgG,亲和纯化 标记抗体浓缩,30X,0.4mlx1,HRP标记的抗人OPN(10A16)小鼠IgG Fab’,亲和纯化 标准品,0.5mlx2,重组人OPN EIA缓冲液,30mlx1,0.05%吐温20的PBS 标记抗体稀释液,12mlx1,1%BSA,含0.05%吐温20的PBS 着色剂,15mlx1,TMB底物液 终止液,12mlx1,1N硫酸 洗涤缓冲浓缩液,50mlx1, 40X,含0.05%吐温20的磷酸缓冲液
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