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激素六项之泌乳素(PRL)

 泌乳素(PRL) ELISA试剂盒

德国DRGEIA1291)

1、实验原理

   DRG公司的泌乳素酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。反应板上的微检测孔包被有能结合泌乳素分子上*抗原位点的单克隆抗体。一份含有内源性泌乳素的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育,该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后,用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中泌乳素的浓度成正相关。加入底物溶液后,显出的颜色强度与病人样品中泌乳素的浓度成正比。

2、试剂盒成分

1)       微量反应板,1 ( 96,微孔中包被了抗泌乳素的单克隆抗体。

2)       酶联物,11ml,辣根过氧酶标记的泌乳素抗血清。 

3)       底物液,11ml (TMB)

4)       标准系列,6支(冻干粉),浓度:052050100200ng/ml

转换系数(1ng/ml=21.1mUI/mL

5)       终止液,0.5M H2SO46ml

3、实验需要器材(但试剂盒不提供)

1)       酶标仪(450±10nm)

2)       移液器

3)       吸水纸

4)       标准水箱

5)       蒸馏水

6)       计时器

4、试剂贮存:

   未开启的试剂在28℃下贮存,在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂,酶联物、底物溶液、标准品和零标准品必须在28℃下贮存。

   微孔反应板必须在28℃下贮存。一旦包装袋被打开,必须将它小心地严封起来。如果包被板的包装被打开,其免疫活性在2个月内稳定,但前提是必须将它密封在装有干燥剂的袋子里。

5、样品的采集

1)       静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下用离心机分离血清,避免溶血。注意:此试剂盒只能使用没用任何添加剂的样品。

2)       必须盖住样本并在实验之前于2-8℃下可贮存48小时。样品需要更长的贮存时间,则应将样品冻存于-20℃的环境下。解冻的样本在检测之前必须上下倒置几次。

注意:用于此试剂盒的样品不能含有任何添加剂。

6、试剂的准备

参考标准:在冻干的标准品中加入1.0ml双蒸水。

注:配制好了的标准品可在2-8℃下稳定存放2个月。想要存放更长时间应当将其冻存于-20℃的环境下。

7、一般注意事项

1)       实验开始前,将所有试剂和样本都平衡至室温,试剂混合时避免起泡。

2)       实验一旦开始,所有的步骤应完整地进行下去。

3)       每一样品的取样都得使用新的取样吸头。

4)       吸光度与温育时间和温度有关,在实验开始后所有的试剂都应准备好,以保证加液时间的一致。

5)       本试剂盒zui大吸光度(OD)1.200-2.000之间室温22,显色10分钟以内。如果zui大OD值高于您酶标仪的上限或低于1.000,则相应的减少或延长显色反应的温育时间。一般情况下,酶免反应的强度与时间和温度成线性,这使得操作者应当适当的调整物理化学环境。

8、实验步骤

1)       将所需数目的板条置于板架上。

2)       将黄体生成素标准系列(052050100200ng/ml)、质控和血清样本分别25μl加入到相应的微孔中,每一样品都得使用新的取样吸头。

3)       100μl的抗泌乳素酶联物于各孔中。

4)       混匀10,此步骤中*混匀很重要。

5)       室温温育(22)30分钟。

6)       弃去孔内的反应液。

7)       用蒸馏水洗板5次。

8)       在吸水纸上把板拍干。

9)       依原先加样顺序,每孔加100μl底物液。

10)   室温(22温育10分钟。

11)   按加底物液顺序,每孔加50μl终止液于各孔中。

12)   10分钟内在450±10nm波长读吸光度。

9、结果计算

1)       计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。

2)       用吸光度值作为纵坐标(y),浓度值作为横坐标(x),以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值(mIU/ml)进行标绘,作一条标准曲线。

3)       用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。根据自己的实际经验或计算机的功能,也可以采用其它的归纳方法进行计算。

4)       如果样本的浓度高于zui高浓度的标准品的浓度或者浓度>200ng/ml,则需要进行稀释,任何稀释了的样品在计算时都必须将相应的稀释因子考虑进去。

10、参考值

我们强烈建议各个实验市都建立自己的正常值和异常值。以下结果是以一定量正常人群的血液样本为准得出的实验结果:

性别

平均值(ng/ml

S.D.ng/ml

5%ng/ml

95%ng/ml

男性

6.44

5.50

0.94

20.94

女性

14.27

5.88

2.39

25.15

 

灵敏度: zui小检测出的泌乳素浓度为0.35ng/ml

 

 

 

本译文仅供参考,详情请以原文为准。

 

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