欢迎来深圳市科润达生物工程有限公司!我们将为您提供周到的服务!销售热线:86-0755-26814430 15711973608
联系我们Contact us
公司名称:深圳市科润达生物工程有限公司
联系人:科润达客服
地址:深圳市坪山区坑梓中兴路14号中城生命科学园A栋3层
首页 > 技术文章 > 德国IBL肺炎衣原体IgM ELISA试剂盒
德国IBL肺炎衣原体IgM ELISA试剂盒
德国IBL肺炎衣原体IgM ELISA试剂盒
(货号:RE57051)
德国IBL中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 
1、 前言说明
衣原体是一种不能运动的革兰氏阳性菌,同时也是一种强制性的胞内寄生菌,而且这种细菌可在其寄主细胞的胞浆内形成明 显的包涵体。这种包涵体在光学显微镜下很容易看到。目前人们知道有三种不同的衣原体对人具有至病性,它们是:沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉衣原体,还有一 种对动物具有至病性的衣原体(兽类衣原体)。沙眼衣原体是世界上性传播疾病zui流行的传播因子(4000-5000万例),并且此传染病的数量还在不断增 加。感染了沙眼衣原体的孕妇可以在分娩时将病毒传染给胎儿,从而导致胎儿患结膜炎或肺炎。 衣原体感染不治疗的个体会导致慢性输卵管炎,并且很有可能出现宫外孕或不孕。在男性中,沙眼衣原体是导致非淋球菌性尿道炎的主要因素。在衣原体感染中,频 繁性的无症状隐性阶段是一个很严重的问题,因为它可能启动慢性疾病。在许多例子中,原发性感染都没有被发现,之后只能检测到由持续上升病原体而引起的后遗 症。
种类
感染机制
疾病
诊断方法
沙眼衣原体
直接传播或性传播:主要感染部位是眼或泌尿生殖道黏膜
淋巴性肉芽肿,沙眼,新生儿或成年包涵体性结膜炎,宫颈炎、输卵管炎、尿道炎、附睾炎、直肠炎及新生儿肺炎。
血清学
肺炎衣原体
呼吸道黏膜浸润
呼吸道疾病
有争议的疾病:心内膜炎,冠心病
心脏病
PCR
鹦鹉衣原体
吸入受染禽类的粪便;接触了受染禽类的内脏。
饲鸟病(鹦鹉热)
镜检
可通过以下方法来检测是否感染:
n        镜检:Giemsa染色
n        PCR
n        血清学:用ELISA检测抗原
           用IF、EIA或ELISA检测抗体
2、应用范围
IBL公司的肺炎衣原体IgM ELISA试剂盒可用于人血清中抗肺炎衣原体IgM抗体的定性检测。
3、实验原理
抗肺炎衣原体IgM抗体的定性免疫酶检测利用的是ELISA技术。包被板上预先包被了能结合样本中相关抗体的肺炎衣 原体抗原。洗板以除去未结合的样品物质,之后加入辣根过氧酶标记的抗人IgM。之后,酶标物会结合到捕获的肺炎衣原体特异性抗体上,加入能产生蓝色反应产 物的TMB底物液后,如果显示蓝色则可知已形成免疫复合物。所显示颜色的强度与样品中肺炎衣原体特异性IgM抗体的量成正比。加入硫酸以终止反应,以便产 生黄色的终点颜色。用一酶标仪在450m处读取OD值。
4、材料
4.1试剂盒成分
1)      肺炎衣原体包被板(IgM):12×8,可拆,微孔中包被了肺炎衣原体抗原,真空密封。                           
2)      IgM样本稀释液:1瓶,100ml,用于样品的稀释,内含抗人IgG,PH为7.2±0.2,即用,绿色白盖。
3)      终止液:待用硫酸,1 瓶,15ml,内含硫酸,0.2mol/l,红盖。             
4)      浓缩洗涤液(20X):1瓶,50ml,PH为7.2±0.2 ,白盖。          
5)      肺炎衣原体抗IgM酶标物:1瓶,20ml,内含过氧化物酶标记的兔抗人IgM,红色黑盖。即用。
6)      TMB底物液,1 瓶,内含TMB,黄盖,15ml,即用。
7)      肺炎衣原体IgM阳性质控,1 瓶    ,黄色液体,2ml,红盖
8)      肺炎衣原体IgM临界质控,1 瓶    ,黄色液体,2ml,绿盖
9)      肺炎衣原体IgM阴性质控,1 瓶    ,黄色液体,2ml,蓝盖       
4.2 实验所需材料和器材
1)      酶标仪,可在450/620测吸光度值
2)      37℃孵化器
3)      手工或自动微孔清理设备
4)      10µl和1000µl的取样吸头
5)      旋涡混合器
6)      去离子水或蒸馏水
7)      试管
8)      记时器
5.样本贮藏和准备:
5.1用人血清做为样本。如果检测在样品收集后24小时内进行,则样品应当存放与2-8℃的环境下;否则应当将其贮存于-70℃—20℃的环境下。如果样品被冻存过,则在检测之前应小心解冻样品,避免反复冻溶。
5.2样品的稀释
检测前,所有的每样品都应按1:100的比例当用IgM样品稀释液进行稀释。在10µl样品中加入1ml IgM样品稀释液,旋涡混合器上完全混合。阳性质控和阴性质控不需要稀释,待用。
6.实验步骤:
实验开始之前仔细阅读操作步骤,严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进 行,为了避免洗板的影响,我建议在洗板步骤时,洗板3次改成洗板5次,洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前,应当在试剂盒提供的结果单上标 记好所有的样品和质控品。取适当数量的板条置于板架上。
请至少做以下几个孔:
1孔(例A1)做空白对照孔
1孔(例B1)做阴性质控
2孔(例C1+D1)做临界质控
1孔(例E1)做阳性质控
如果有必要的话,我们建议您质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作,并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加每一质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37 ± 1℃
1)      加100µl质控品或已稀释样本于相应反应孔中,留A1孔做空白。
2)      盖板
3)      37℃±1℃下温育60+5分钟。
4)      温育之后,移去粘性金属板,弃去孔内反映液,用300µl洗涤液洗板3次,每次洗板循环间的时间间隔应大于5秒,并在吸水纸上拍干。
注意:洗板很重要,如果洗板不充分,则检测结果会不,而且会错误的提高OD值。
5)      除空白孔外,加100µl 肺炎衣原体抗IgM酶标物于各孔中,盖板。
6)      37℃±1℃下避光温育30+2分钟。。
7)      重复步骤4。
8)      每孔加100µl TMB底物液。
9)      室温避光温育30分钟。
10)  以加底物一样的顺序和速度在每孔中加入100µl终止液。
11)  30分钟内在450nm读吸光度。
7.结果判定:
1)必须符合以下条件, 实验结果才能成立.
空白孔A1:OD<0.100
阴性质控孔B1:OD<0.200
临界质控孔C1和D1:OD值界于0.250---0.900
阳性质控孔E1:OD大于或等于临界
2)结果计算:cut-off值是临界质控检测结果的平均值
例如:临界质控OD值1.44+临界质控OD值0.42=0.86/2=0.43
Cut-off值=0.43
3)结果解释:
如果样品的OD值比cut-off值高10%以上则认为此样品呈阳性
如果样品的OD值在比cut-off值高或低10%的范围内,则认为次样品是可疑的。(灰色区域)建议2-4周后用新鲜样品重复检测,如果结果仍位于灰色区域内,在认为此样品为阴性。
如果OD值比cut-off值低10%以上则认为此样品呈阴性。
4)实验结果的单位

= [Units = U]
 
病人的(平均)OD值x 10                     

Cut-off值

= 28 U ( Units)
例如:1.204 x 10                        

0.43
临界值:10U
灰色区域:9-11U
阴性:<9 U
阳性:>11 U
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
中国*总代理:深圳市科润达生物工程有限公司
公司地址:深圳市南山区蛇口沿山路10号6层。:518067
:(8线) 传真:+86 755 26814431
免费订货:。
技术咨询:,;手机,;,kerunda@szonline.net
www.kerunda.com.cn
欢迎索取详细资料,在线:kerunda_tech
地址:深圳市坪山区坑梓中兴路14号中城生命科学园A栋3层
联系人:科润达客服

深圳市科润达生物工程有限公司 版权所有  主营:TNF-α检测试剂盒|HMGB1多克隆抗体|糖代谢相关检测试剂|美国Invitrogen细胞因子

ICP备案号:粤ICP备18097826号 管理登陆 技术支持:化工仪器网   总流量:271120  网站地图

在线客服
在线客服
扫码关注我们
用心服务 成就你我