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RSV IgM ELISA试剂盒说明书
RSV IgM ELISA试剂盒说明书
(德国IBL:RE56891)
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1、实验原理
此酶免试剂盒可用于人血清中抗RSV(呼吸道合胞病毒)IgM抗体的体外定性和定量检测。
2、前言说明
在患有细支气管炎或肺炎的六个月大的婴儿中,可发现呼吸道RSV感染和特定的临床症状之间有明显的。在年龄稍大 的婴儿和小儿中,感染症状会温和一些。 25%以上的RSV呼吸道感染都是可被察觉的。由于RSV再次感染的可能性,人们认为这些再次感染的抗体与成年人中这些疾病的缓慢发展过程(类似于感冒) 有关。然而,特别是早年,血清抗体并不能成为抗呼吸道感染的有效保护。因此,这种病原体可能会引起细支气管炎或引起四岁大的婴儿患肺炎。基于呼吸道合胞病 毒抗原的关系,我们可以将呼吸道合胞病毒分为两大类(A和B)。病毒的表面糖蛋白(G糖蛋白和融合糖蛋白)可产生病毒抑制抗体。RSV的A和B类病毒的G 糖蛋白与F糖蛋白相比明显不同。用于RSV血清学诊断的补体结合实验,其结果不是很理想。用于RSV感染的血清学诊断的酶免检测具有很高的诊断价值,因为 酶免检测灵敏度很高,并且可区分不同抗原的免疫球蛋白。在RSV感染中,IgM抗体反应可能不会出现或很弱,以至于不能获得可靠的实验结果。在一急性感染 中,因为IgA抗体可能会持续几个月或几年,所以单一样品中的IgG抗体检测并不明显。被推荐为急性RSV感染血清学检测方法是检测血清中的IgG抗体 (双份,要求其浓度明显提高了)。
3、实验原理
此固相ELISA试剂盒利用的夹心法原理。包被板上包被了抗原。用对人IgM具有特异性的酶标二抗来检测结合到包被抗原的样品特异性抗体。底物反应后,所显示的颜色强度与检测到的IgM特异性抗体的量成正比。样品的结果可直接使用标准曲线得。
4、试剂盒组成:
4×2ml
标准品A-D
1;10;50;150U/mL,待用
标准品A=阴性质控           标准品B=临界质控
标准品C=弱阳性质控         标准品D=阳性质控
内含抗RSV的IgM抗体,PBS(磷酸缓冲液),稳定剂。
1×14ml
酶标IgM
红色,待用。内含过氧酶标记的抗人IgM,蛋白缓冲液,稳定剂。
1×12×8
包被板
可拆,包被有特异性抗原。
1×14ml
TMB底物液
含TMB
1×14ml
TMB终止液
0.5M的H2SO4
1×60ml
稀释液
含PBS缓冲液,<0.1%NaN3
1×60ml
浓缩洗涤液
浓缩型(10×),含PBS缓冲液,吐温20
粘性金属板
用于在温育时遮盖包被板
塑料袋
用于储存不用的板条
 
5、实验所需材料但试剂盒不提供
1)        RF吸附剂
2)        移液器,体积:5;50;100;500 µL
3)        校准仪
4)        样品稀释用试管(1ml)
5)        带试剂储器8道移液器
6)        洗涤瓶,自动或半自动洗板机
7)        能在450nm处读数的酶标仪
8)        双蒸水或去离子水
9)        吸水纸,取样吸头和计时器
6、实验前的准备说明
6.1成分准备
稀释/溶解
成分
 
稀释液
比例
备注
贮存
稳定性
60ml
洗涤液
加600ml
双蒸水
1:10
加热至37°C以溶解
结晶,充分混合
2-8°C
 
8周
6.2样品稀释
样品
稀释
稀释液
比例
备注
血清/血浆
全部稀释
稀释缓冲液
1:101
例:5µL+500µL
样品中IgM浓度高于zui高标准品的应当进一步稀释。
6.3用RF吸附剂处理:
注意
为了避免特异性IgG和类风湿因子的干扰,病人的血清应当用RF吸附剂处理(RE59059)。
标准品和质控品千万不要用RF吸附剂处理。
1.
在400µL按1:101的比例稀释的样品中加入20µL RF吸附剂。充分混合。
2.
室温(18-25℃)下温育≥1min(﹤15min)
为了避免吸附特异性抗体,应当避免温育时间﹥15min。
预处理的样品可能会是浑浊的。
7、实验步骤:
1)        加100µL标准品和已稀释样本于相应反应孔中,在定性检测中只使用标准品B。
2)        封板后室温(18℃-25℃)温育60分钟。
3)        移去粘性金属板,弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干。
4)        在每一微孔中加入100µL酶联物。
5)        封板后室温(18℃-25℃)温育30分钟。
6)        移去粘性金属板,弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次,在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时,如果有条件的话,可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。
7)        每孔加TMB底物液100µL。
8)        室温(18℃-25℃)避光温育20分钟。
9)        在每一微孔中加入100µLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动包被板以使试剂混合均匀。此时,颜色蓝色变成黄色。
10)     加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
8、结果计算
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法,以标准品的OD值为Y轴,浓度为X轴,绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对 数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图,用标准品的每一单值进行计算(样品结果明显异常的值必须删除掉,应使用更加合理的单值)。样 品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了,就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于zui高标准,则应根据实验前的准备说明所述对样品进 行稀释,并重新检测。
9、结果判定: >12 U/ml  为阳性,8 - 12 U/ml  为可疑,< 8 U/ml  为阴性
此检测结果并不是任何治疗结果判定的*因素,它应当结合临床观察和诊断结果加以判断。
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
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