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莱姆氏螺旋菌IgG ELISA试剂盒
莱姆氏螺旋菌IgG ELISA检测试剂盒说明书
                           
(德国IBL进口原装:RE57201
德国IBL中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 
1、用途: 本试剂盒用于定性/定量检测血清或血浆中抗莱姆氏IgG抗体, 可以检测所有莱姆氏螺旋菌亚型的感染
2、简介: 莱姆病是一种蝉传螺旋体感染性疾病。莱姆病的病原体为莱姆病螺旋体,能引起人类慢性游走性红斑,以及心脏、神经和关节等多系统受累的疾病,对人群健康危害较严重。莱姆病的实验室诊断方法主要是血清学方法。本试剂盒采用特异性莱姆氏螺旋菌三个亚型的混合抗原进行微孔板包被,具有较高的检测灵敏度和特异性。
3、检测原理:采用夹心ELISA方法,将莱姆氏螺旋菌抗原包被于微孔板底部,检测时,稀释样本及试剂盒质控品加入微孔板,样本中的抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体与抗原结合,经过孵育,洗涤,加入HRP标记的抗人IgG二抗,在经过孵育,洗涤后加入HRP酶的底物显色剂TMB,终止显色,酶标仪读板,根据标准曲线或者Cutoff值判断样本的阴阳性。
4、注意事项和预防措施
1)       此试剂盒仅用于体外诊断和专业人士使用。
2)       在检测开始之前,仔细和完整的阅读说明书,使用试剂盒提供的包装插件的有效版本,    确保所有的程序都清楚。
3)       如果试剂盒有破坏的请与IBL公司或是提交你的申请,但自您拿到试剂盒后zui迟不超过一个星期。检测时请不要使用已被损害的试剂,以确保自身安全。
4)       按照批号和有效期,不混合使用不同批号的试剂,也不要使用过期的试剂。
5)       遵守好的实验准则和安全指南。穿实验服,带橡皮手套,有必要时请戴护目镜。
6)       此试剂盒中含有会伤害眼睛和皮肤的有害试剂。请阅读材料来源和标签获取详细信息。产品的材料安全数据单能够从IBL公司主页上下载,也可直接咨询IBL公司获取。
7)       根据国家生物有害物质及安全条例,所有化学药品和准备或使用过的试剂都应当做有害物质进行处理。
8)       避免接触终止液,以免刺激或着烧皮肤。
9)       试剂盒中的所有试剂(包括检测过的人血清/血浆)对HIV/II,HbsAg和HCV都表现为阴性,但是试剂中会出现此类病毒(HIV/II,HbsAg和HCV)或其他具有感染性的病原体的可能性都不能完全被排除.因此,所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理
5、贮存与稳定性
试剂盒和运输环境和储存环境温度为2-8℃,避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的包被板条在三个月内稳定,前提是将包被板条用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。
6、样品的采集与贮存
血清/血浆(EDTA抗凝)
按照一般原则进行静脉采血。自样品采集到检测都应保持血液样品的完整性。不要使用易容血、黄疸血和脂血样品。如果样品出现混浊,实验前应将其离心以除去颗粒物质。
贮存
2-8℃
≤-20℃(分装冻存)
避免高温和太阳直射,避免反复冻融。
稳定性
5天      
12个月
7、试剂盒组份
1×12×8
MTP
包被板,可拆,微孔中包被了特异性抗原。
1×12mL
ENZCONJ
酶联结合物,绿色,即用性,HRP标记的抗人IgG抗体
4×1.5mL
CONTROL A-D
A-D标准品: 含量为: 2; 10; 50; 200 U/mL,其中标准品B作为Cutoff标准品,内含人抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体,稳定剂
1.5mL
CONTROL+
阳性质控,即用,内含人抗莱姆氏螺旋菌IgG抗体,稳定剂
1.5mL
CONTROL-
阴性质控,即用,内含人血清和稳定剂。
1×100mL
DILBUF
稀释用缓冲液,蓝色,内含磷酸缓冲液、去垢剂、BSA和稳定剂
1×100mL
WASHBUF
洗涤液(10×),内含磷酸缓冲液、去垢剂和稳定剂。
1×12mL
TMB SUBS
TMB底物液,即用,内含TMB。
1×12mL
TMB STOP
TMB终止液,即用,含1M H2SO4
8、实验所需器材(但试剂盒不提供)
1)       移液器(Eppendorf移液器或类似仪器,CV<3%),体积为5μL;100μL;1000μL
2)       漩涡混匀器
3)       37℃孵箱
4)       样品稀释用试管(1mL)
5)       带有储器的8道移液器。
6)       洗涤瓶,自动或半自动的包被板洗涤设备。
7)       可在450nm处读数的酶标仪(参考波长:600-650nm)
8)       双蒸水或去离子水
9)       坐标纸,取样吸头,记时器。
9、实验操作及注意事项
1)       样品处理不合理或对实验操作进行任何改动动都会影响实验的结果。取样体积、温育时间、欲处理步骤都必须严格按说明进行。只能使用标准移液器和标准设备。
2)       一旦实验开始,所有的步骤都必须完整的进行下去,不允许中断。把所有试剂和样品都拿到18-25℃的实验室中,在使用前,轻轻摇动液体试剂和样本,试剂混合过程中要避免气泡。
3)       请勿接触试剂、移液器、微孔/试管。加试剂和样本时,请使用新的取样吸头,以避免交叉污染。不用的试剂应用盖子盖好,以免重复使用。
4)       用定标仪对反应板进行校准。
5)       温育时间会影响实验结果。微孔加样的顺序和时间都必须一致。建议使用8道移液器加样。
6)       包被板的清洗非常重要,微孔清洗不好将会形成错误的实验结果。建议使用多道移液器或自动微孔清洗设备进行清洗。每次温育间隔期间避免微孔干燥。加洗涤液和吸液时要避免碰到包被孔。清洗和加试剂时都应特别小心。清洗时,在微孔中的加入洗涤液缓冲液,同时确保无微孔中无残渣。
7)       湿度会影响包被板,所以在未到达室温时请勿打开包装,未使用的包被板要重新密封于装有干燥剂的包装袋中。
8)       此实验也可以在自动操作系统上进行,具体信息请见“性能”。
10、实验前的准备说明
10.1成分的准备
稀释/溶解
成分
 
稀释液
比例
备注
贮存
有效期
100mL
洗涤液
1000mL
双蒸水
1:10
有必要的话,加热至18-25℃以溶解所有结晶
2-8℃
2-3月
10.2样本稀释
10.2.1 血清/血浆样本
样本
稀释
试剂
比例
备注
血清/血浆
按一般规则稀释
稀释缓冲液
1:101
10 μL样品 + 1 mL 稀释缓冲液
样品中IgG浓度高于zui高标准品含量的样品必须进一步稀释,并重复检测。
10.2.2 脑脊液样本:按照Reiber法进行脑脊液检测时,有必要用使血清和脑脊液具有相同的浓度或相同的Cutoff判别范围(OD值为1-0.1),通过下面方式稀释可以实现:
样本
稀释
试剂
比例
备注
血清/血浆
按一般规则稀释
稀释缓冲液
1:401
5μL样品 + 2 mL 稀释缓冲液
   脑脊液
按一般规则稀释
稀释缓冲液
1:4
50μL样品 + 150μL 稀释缓冲液
Cutoff值可以通过1:101稀释参数来校正,1:401稀释血清Cutoff值,稀释度乘以4。1:4稀释的脑脊液Cutoff值,稀释度除以25。
如果检测样本的OD值在1.0和0.1之外,则应通过下列稀释后,再检测
血清/血浆
1:100
1:200
1:400
1:800
1:1600
脑脊液
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
11、实验步骤
1)       将标准品、质控品、稀释样本分别100μL加入包被板的微孔中。定性检测只需加入标准品B。
2)        盖板,37℃下温育60min。
3)        弃取微孔内反应液,每孔用300ul的已稀释好的洗涤液洗3次,在吸水纸上将板拍干。
4)        在每一微孔中加入100μL的二抗酶结合物。
5)        盖板(新的粘性金属板),37℃下温育30分钟。
6)        弃取微孔内反应液,每孔用300μL的已稀释好的洗涤液洗3次,在吸水纸上将板拍干。
7)        如果可以的话,使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同,使用自动置换型移液器并避免气泡产生。
8)        每孔加100μL TMB底物液
9)        18-25℃下避光温育30min,
10)    每孔加100ulTMB终止液以终止底物反应。加终止液后,60分钟内在450nm处测OD值(参比波长:600-650nm)
12、质量控制
严格按照说明书操作所获得的实验结果才是有效的。使用者必须严格遵守实验室优化管理规定或其他的实验标准。按照质控单的要求,所有的标准品浓度都必须允许范围内。如果其标准不符合要求,则实验无效,必须重做。每个实验室应当使用已知浓度的样品做进一步的有效质控。如果实验背离实际结果,应检查以下问题:试剂有效期,贮存条件,取样器,实验设备,温育时间,清洗方法。
13、结果计算:计算结果可作定性或者定量判断
13.1 定性判断:标准品B的OD值可以作为判断阴阳性结果的Cutoff值,样本OD之在Cutoff值上下10%范围内,则结果位于灰区内,判为可疑。如果高于灰区则判为阳性,低于灰区则判为阴性。
典型例子:
Cut-off=OD(标准品B,临界标准品)=0.45
样本OD=0.60
临界指标(COI)=0.60/0.45=1.33。该样本判定为阳性
13.2定量判断:在半对数坐标纸上或用自动生成的方法,以标准品的OD值为Y轴,浓度为X轴,绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图,用标准品的每一单值进行计算(样品结果明显异常的值必须删除掉,应使用更加合理的单值)。样品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了,就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于zui高标准,则应根据实验前的准备说明所述对样品进行稀释,并重新检测。
典型标准曲线
例子,   不能用于实验结果的计算
标准品
U/ml
平均OD
A
2
0.008
B
10
0.267
C
50
1.097
D
200
2.114
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
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免费订货:。
技术咨询:,;手机,;,kerunda@szonline.net
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