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CA72-4 ELISA试剂盒说明书
CA72-4 ELISA试剂盒说明书
(德国DRG进口原装:EIA5071)
德国DRG中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 
1、简介
DRG CA72-4 ELISA试剂提供的材料用于在人体血清或血浆中定量检测肿瘤相关抗原CA72-4 (TAG-72)。本实验仅供体外诊断使用。
CA72-4(癌抗原72-4)zui初被描述为由B72.3识别的抗原因子。B72.3是由相应的原发肿瘤转移后的膜萃取物免疫杂交生产的鼠单克 隆抗体。CA72-4被证实是1MDa的粘液样糖蛋白,合成物称为TAG72(肿瘤相关抗原72)。TAG72蛋白的分子量为48KD. 血清和血浆中的CA72-4的水平升高见于某些恶性疾病,包括胰、胃、胆、结肠、乳腺、卵巢、子宫颈、子宫内膜的肿瘤。它对胃肠道和卵巢的肿瘤有很高的诊 断学的敏感性。尽管在一些良性的疾病如风湿病和卵巢囊肿也发现有CA72-4的升高,但是临床研究表明,对于胃肠道和卵巢肿瘤,特异性诊断高达95%。 CA72-4的水平和肿瘤的大小及分级紧密关联。CA72-4是胃肠道肿瘤的病人选择治疗学的监测和随后的护理的指标。另外合适的指标是CA199和 CEA,另外,CA72-4是卵巢肿瘤的病人选择治疗学的监测和随后的护理的可靠性指标,尤其是对于CA125阴性的病人。
2、实验原理
   DRG公司的CA72-4酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。反应板上的微检测孔包被有能结合CA72-4分子上独特抗原位 点的单克隆小鼠抗体。一份含有内源性CA72-4的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育,该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗血清。孵 育后,用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中CA72-4的浓度成正相关。加入底物溶液后,显出的颜色强度与病人样品中 CA72-4的浓度成正比。
3、试剂盒成分
1)微孔板:12x8孔,可拆,微孔中包被抗CA72-4 单克隆抗体。
2)标准品(标准品0-4):5支 0.5ml,即用,浓度为0,3,20,50,100U/ml,内含无水银防腐剂。
3)质控高&低:2支 冻干粉,0.5ml,见“试剂准备”,质控品的浓度及范围请见试剂瓶标签或质控单。内含无水银防腐剂。
4)样品稀释液:一支,3ml,即用,内含无水银防腐剂。
5)酶联物:1支 14ml,标记辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体,内含无水银防腐剂。
6)TMB底物液:一支 14ml,即用。
7)终止液:0.5M的硫酸,一支 14ml,即用,避免接触终止液,以免刺激或着烧皮肤。
8)洗涤液(40X):一支 30ml.
注意:用于样品稀释的样品稀释液应视需要而定。
4、实验需要器材(但试剂盒不提供)
1)      酶标仪(450±10nm)。
2)      移液器
3)      吸水纸
4)      蒸馏水
5)      计时器
6)      坐标纸或是数据处理软件
5、试剂的储存与稳定性
未开启的试剂在2-8℃下储存,在保质期内保持其稳定性。不要使用过期的试剂。所有开启了的试剂都应在2-8℃下储存,微孔板需在2-8℃下储存,一旦打开了微孔板的袋子,需小心地将其重新密封。
6、试剂的准备:
在使用前将所有的试剂和所需的板条平衡至室温。
质控品:在冻干粉中加入0.5ml的蒸馏水使其复溶,并至少放置10min,在使用前充分摇匀。复溶后的质控品需在-20℃下储存。
  洗涤液:在30ml浓缩的洗涤液中加入1170ml的蒸馏水,zui终洗涤液的容积为1200ml。稀释后的洗涤液在室温下两星期内保持稳定。
7、样品的采集与存储
本实验可使用血清或血浆(使用EDTA或肝素抗凝)样品,不要使用溶血﹑脂血﹑黄疸的样品。注意:含叠氮钠的样品不能用于此实验。
7.1样品采集
血清:静脉采血,允许使用凝血,在室温下用离心法分离血清。全血未完全凝固前请勿离心,接受了抗凝剂治疗的病人血液可能需要更长的凝血时间。
血浆:将全血收集到含有抗凝剂的离心管内,收集后马上用离心法分离。
7.2样品的储存
样品盖好盖子后,可在实验前2-8℃下储存5天,要更长时间储存,应在-20℃下冻存。在开始实验前应避免反复冻融样品。
7.3样品的稀释
在zui初的实验中,要是样品的浓度高于zui高标准品,则样品应用按实验步骤所描述的10倍或100
倍稀释。在计算浓度时需乘以此稀释系数。
例子:
a)      按1:10稀释: 10ul的血清+90ul的样品稀释液(充分摇匀)。
b)      按1:100释稀:10ul按a)稀释的血清+90ul的样品释稀液(充分摇匀)
8、实验步骤
8.1总论
1)在使用前所有试剂和样品均需平衡至室温,所有试剂要充分混合但不要起泡。
2)一旦实验开始,所有步骤都必须进行到底而不能中断。
3)对每种试剂﹑标准品和样品使用一次性的吸嘴,以避免交叉污染。
4)吸光率决定于温育时间和温度,在开始实验前,建议准备好所有的试剂,将需要检测的微孔板固定在板架上,这些步骤保证每次加液步骤所需时间相同而没有中断。
5)按照一般的规律,酶反应时间与温育时间和温度成线性比例。
8.2操作步骤
每次实验都应含有一条标准曲线
1)将实验所需数目的板条固定在板架上。
2)用一次性吸嘴将20ul的标准品﹑质控品和样品加入相应的检测孔中。
3)每孔加入100ul的酶联物。
4)彻底混合十秒,在此步骤里,充分摇匀十分重要。
5)不用封板,在室温下温育120分钟。
6)快速弃去检测孔中的内含物,每孔用400ul洗涤液洗板五次,在吸水纸上用力拍板以除去残留的液体。注意:洗板步骤是否正确将直接影响到实验的灵敏度和性。
7)每孔加入100ul的底物液。
8)在室温下温育30分钟。
9)每孔加入100ul的终止液终止反应。
10)            在加终止液后十分钟内,室温下,于450nm处读取吸光率。
9、结果计算
1)计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光率。
2)以吸光率为Y轴,浓度为X轴,按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓度值,绘制标准曲线。
3)利用样品的平均吸光率,在标准曲线上得出其相应的浓度值。
4)自动方法:使用立方函数﹑四参数模式或双对数的计算机程序可得到结果。
5)样品的浓度可从标准曲线上直接获取。样品的浓度高于zui高标准品的浓度则需进一步稀释。在计算样品的浓度的时候,要乘以稀释倍数。
下面是CA72-4 ELISA的标准曲线的典型例子。
标准品
吸光率(450nm)
零标准品(0 U/ml)
0.08
标准品1(3U/ml)
0.19
标准品2(20 U/ml)
0.59
标准品3(50 U/ml)
1.16
标准品4(100 U/ml)
2.02
 
 
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准!
 
 
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