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S100B蛋白酶免ELISA试剂盒
S100B蛋白酶免ELISA试剂盒
德国DRG原装进口,货号:EIA5169
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预期用途
此试剂盒用于人血清和血浆中S100B浓度的检测,仅用于实验室
实验原理
此试剂盒基于两抗体与S100B结合,一个抗体固定在包被板上,另外一个则被HRP标记。试验基于两步法,每次洗板后,结合的和游离的就会分离,底物液TMB加入,会发生颜色变化,终止液加入终止反应,吸收值检测。样品中的S100B的浓度计算可从标准品着手。颜色强度与样品中的S100B的浓度成正比
试剂盒组成
1.       S100B标准品,6支,冻干粉,STD0-STD5
2.       质控品,2支,冻干粉,阴性质控和阳性质控
3.       酶联物缓冲液,1支,20ml,Tris缓冲液,BSA10g/L,0.05%吐温
4.       酶联物,1支,1ml,HRP标记的抗S100B
5.       试验缓冲液,1支,12ml,Tris缓冲液,BSA10g/L,稳定剂
6.       包被板,可拆,包被有抗S100B
7.       TMB底物液,1支,15ml,H2O2-TMB 0.25g/L,避免皮肤接触
8.       终止液,1支,15ml,0.15mol/L硫酸,避免皮肤接触
9.       洗涤浓缩液,50X,1支,20ml,NaCl 45g/L,吐温20 55g/L
实验所需但试剂盒未提供
1.       去离子水
2.       自动移液器
3.       酶标仪
注意:所有试剂应保存在黑暗处2-8℃,微孔板平衡至室温方可打开包装,使用完后立即密封,不要移去未用板条的粘合条
注意事项
1.       试剂内含有硫柳汞防腐剂
2.       配制和吸取试剂时应按zui高度要求操作
3.       所有试剂都有各自的批号,不要混用不同批次内的物质
4.       S100B的检测范围为10-5000pg/ml
5.       标准品的具体浓度见瓶上标签
6.       不要使用严重溶血样品
7.       避免底物液暴露在阳光,金属或氧化剂下
操作步骤
样品准备
S100B检测可使用人血清或血浆,不要使用溶血样品,样品可在2-8℃下保存1天,更长的保质期的话可放置在-20℃,避免反复冻融,不要将样品放置在室温下的时间过长,样品浓度高于5ng/ml时,应用试验缓冲液进一步稀释
标准品和质控品的准备
用1ml的去离子水配制标准品和质控品,可保存于2-8℃下4周,-20℃6个月,建议分装保存于-20℃。标准品浓度见标签。避免反复冻融和长时间暴露在室温下
酶联物的准备
使用前2小时准备
50ul的酶联物+1.0ml的酶联缓冲液(稀释的酶联物的量与试验样本量成正比),混合5min,避免气泡产生,室温下(22-28℃)可保存3小时
洗涤液准备
10ml的洗涤浓缩液+490ml的去离子水;不同的体积但保持同一稀释比例;室温下(22-28℃)可保存至标签上所示的有效期
实验步骤
建议做双份检测,包括标准品,质控品和样品,还有一个空白对照孔
试剂
标准品
样品/质控
空白对照
标准品S0-S5
质控
50ul
 
 
样品/质控
 
50ul
 
试验缓冲液
50ul
50ul
 
室温下孵育2小时,弃去孵育液,每孔加300ul的洗涤液洗板6次
稀释的酶联物
100ul
100ul
 
室温下孵育1小时,弃去孵育液,每孔加300ul的洗涤液洗板6次
TMB底物液
100ul
100ul
100ul
黑暗处,室温下孵育30min
终止液
100ul
100ul
100ul
轻轻摇动微孔板,酶标仪上读数(450nm)
结果计算
1.       计算每一标准品和样品的平均OD值
2.       以标准品吸收值和浓度绘制一zui合适的标准曲线(三次回归或四参数)
3.       从标准曲线上可直接读取样品浓度
 
附:采用全自动酶标仪检测,只需检测前设置好酶标仪的相关参数,如坐标参数(线性,半对数)和计算方式参数(三次回归、四参数或双对数曲线方程),即可直接得到结果
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
 
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