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NSE ELISA试剂盒
NSE ELISA试剂盒
德国DRG原装进口,货号:EIA4424
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预期用途
此试剂盒仅用于研究,不能用于诊断
实验原理
此试剂盒采用的是酶免法,样品,标准品,质控品和生物素标记的抗NSE抗体在微孔内孵育,孵育期间,特异性NSE与包被抗NSE抗体结合,未结合的NSE抗原被洗去,酶联物加入每孔,孵育,未结合的酶联物被洗去,结合的酶联物的量与样品中NSE的量成正比,加入底物液后,蓝色强度与样品中的NSE抗原的浓度成正比。
注意事项及预防措施
1.       试剂盒内的成分完整,不同批次的成分不能混用
2.       潜在生物危害的材料:阴性和阳性质控基质是人血清,标准品血清对HIV,HbsAg和HCV都表现为阴性,但是试剂中会出现此类病毒(HIV/II,HbsAg和HCV)或其他具有感染性的病原体的可能性都不能完全被排除。因此,依据CDC/美国国立卫生研究手册“微生物和生物医学实验室安全”,建议试剂应视为2级生物安全处理
贮存及稳定性
1.       试剂盒保存在2-8℃,微孔板装在含有干燥剂的密封袋内
2.       试剂盒直至有效期
3.       TMB底物液是无色的,如果溶液变蓝,则应替换,贮存和使用过程中不要将试剂暴露在强光下
试剂盒组成
1.       微孔板,96T,链霉亲和素包被
2.       酶联物和抗体液,11ml,HRP标记的抗NSE抗体和生物素标记的抗体液
3.       标准品,0.5ml/支,浓度范围:5,25,50,100,200ug/ml,分装冻存,标准品在室温下不稳定
4.       高和低质控,0.5ml/支,参考值见标签,分装冻存,质控品在室温下不稳定
5.       样品稀释液或零标准品,11ml,
6.       TMB底物液,11ml,缓冲液内含有过氧化氢和Tetramethylbenzidine
7.       洗涤缓冲浓缩液,10ml,100X,10ml的浓缩液+990ml的去离子水混匀即得工作洗涤缓冲液
8.       终止液,2N 盐酸
9.       固定板,用于固定板条
实验所需材料但试剂盒未提供
1.       酶标仪
2.       移液器  体积:25,100ul
3.       1L的洗涤瓶
样品采集和处理
静脉穿刺采集全血,自然凝集,室温下离心分离出血清,贮存于无菌管内
延长全血的贮存可能会导致血细胞释放NSE
如果血清不立即检测的话,可在2-8℃下保存1天或是-20℃下保存30天
样品不能反复冻融,不要将样品放置在自动除霜冰箱内
不要使用脂血和溶血样品
不建议采用血浆做实验,因为血小板会释放NSE
实验准备
1.       实验前,将所有样品,试剂平衡至室温,混匀
2.       实验开始前将所有试剂准备好,实验一旦开始,就要无中断的完成,以得到zui可靠和一致的结果
3.       每次取样都用新的枪头吸取
实验步骤
1.       将实验所需板条固定好,做好样品标记
2.       吸取25ul的标准品,质控品和样品于相应的孔内
3.       每孔加入100ul的酶联物和抗体液
4.       室温下孵育60min
5.       弃去孵育液,每孔加入300ul洗涤缓冲液洗板5次
6.       每孔加入100ul的TMB底物液
7.       室温下孵育30min
8.       每孔加入50ul的终止液,酶标仪读数
操作注意事项
1.       洗板,孔内水滴要彻底清除
2.       所有样品和试剂都要加入至孔底部,漩涡混合或振荡不要求
3.       吸收值是孵育时间和温度的函数,建议试剂和样品加样的时间间隔一致,无中断
4.       基于同样的原因,样品数不超过20个的,标准品设置双份检测
5.       血清样品中NSE浓度高于200ug/L时,则需进一步稀释,重新检测
结果计算
1.       标准品的浓度为X轴,吸收值为Y轴绘制标准曲线
2.       按以下参考标准曲线获得样品NSE值(以下数据仅供参考,不能用于本次试验的结果计算)
 
 
 
附:采用全自动酶标仪检测,只需检测前设置好酶标仪的相关参数,如坐标参数(线性,半对数)和计算方式参数(三次回归、四参数或双对数曲线方程),即可直接得到结果
 
 
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
 
 
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