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放射免疫分析法

放射免疫分析法
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根据抗原抗体特异性结合的原理,以放射性同位素标记抗原或抗体,根据射线的多少定性或定量测定待检标本中抗体或抗原的量的一种检测分析技术.
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主要有两种:RIA和IRMA
相同: 均为以抗原抗体的免疫反应为基础,测定对象为物质的抗原;
不同:RIA为竞争性,标记物为抗原
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  结合部分放射性与待测抗原浓度呈负相关,在直角坐标系呈曲线
  为了产生竞争,抗体仅使用结合50%抗原的量,故灵敏度较免放法低
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IRMA 非竞争性,标记的是抗体,且为过量(高滴度)
结合部分放射性与待测抗原浓度呈正相关,因抗体为过量,不存在竞争结合,故结合在固相物上的放射性计数与抗原浓度呈正比,在直角坐标系近似直线
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1 RIA 放射免疫: 基于竞争法原理
标记抗原(Ag*)和非标记抗原(Ag)与限量抗体(Ab)竞争性结合。随着Ag增加,Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放射量降低,二者变化成反比函数关系。                 
 

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 2  IRMA 免疫放射:非竞争性结合
2.1单位点抗原IRMA原理图:
 
 先用过量标记抗体与待测抗原进行反应,形成抗原抗体复合物;用固相抗原结合未结合标记抗体并将其分离, 测定上清液的放射量
 
2.2双位点抗原IRMA原理图:
 
先用固相抗体与抗原结合,再用过量的标记抗体与抗原的另一决定簇结合,形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物,洗弃剩余标记抗体,测固相上放射量。
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德国IBL放免试剂盒 基本加样步骤:
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           试剂   (零标准品) S0   S1 ~S5   样品   标记抗体/标记抗原
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按说明书依次入试管内
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             孵育放置等
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             洗涤液或分离剂 
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              Υ-计数器读数
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结果计算:
  以N/T、B/T计算NSB、S0 结合百分率,以B/B0 计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
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