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人抑胃肽(活性型)ELISA检测试剂盒

人抑胃肽活性型)ELISA检测试剂盒
日本IBL原装进口,货号:27201
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日本IBL中国*代理,人抑胃肽(活性型)ELISA检测试剂盒。日本IBL中国*代理,人抑胃肽(活性型)ELISA检测试剂盒。
前言简介日本IBL中国*代理,人抑胃肽(活性型)ELISA检测试剂盒。日本IBL中国*代理,。
肠降血糖素是一类胃肠激素, 当人体进食后,能诱导其体内胰岛β细胞释放胰岛素同时抑制胰高血糖素的释放.
GIP是1970年从肠粘膜分离出来的一种典型的的类GLP-1肠降血糖素,称为抑胃肽,后又更名为葡萄糖依赖性促胰岛素肽.它是由43个氨基酸组成的直链肽,属于胰泌素和胰高血糖素族,分子量为5100,由小肠粘膜的K细胞所产生。据报道,GIP受体在很多种细胞内(如胰腺β细胞, 脂肪细胞, 人成骨细胞)都会表达,对机体细胞内营养物质的储存起着至关重要的作用,同时可通过调节GIP信号改善胰岛素抵抗综合症.
血液中的活性型GIP(1-42)能通过二肽基肽酶IV(DPP-IV)作用迅速地失活为GIP (3-42)
此ELISA检测试剂盒仅用于活性型抑胃肽(1-42)的检测
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原理日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
此试剂盒基于夹心法原理,运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与样品中人活性型抑胃肽的量成正比.
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检测范围日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
1.6 - 100 pg/mL (0.3 - 20 pmol/L)
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预期用途日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
仅供科研用
此IBL试剂盒能用于EDTA-血浆中人活性型抑胃肽(GIP)的定量检测
样品收集后需加入二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂,或用特定的方法,确保抑胃肽的完整性.
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试剂盒成分日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
1  预包被板:              抗GIP (C)兔子IgG,亲合纯化                96T
2  酶标记抗体:
   (30倍浓缩)HRP标记抗GIP (N) (6A1A)小鼠IgG,亲合纯化         0.4mL x 1
3  标准品:             人GIP  (1-42)                          0.5mL x 2     
4  EIA缓冲液:         含1% BSA, 0.05%吐温20  BPS                         30mL x 1
5  标记抗体稀释液:       含1% BSA, 0.05%吐温20  BPS                   12mL x 1
6  显色剂:                                 TMB底物液                                                15mL x 1
7  终止液:                                      1N硫酸                                                   12mL x 1
8  浓缩洗涤液:
 (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20  BPS                      50mL x 1
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操作说明日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
1实验所需器材但试剂盒没有提供
  酶标仪                微移液管及其吸嘴
  量筒及烧杯             去离子水
  冰箱(4°C)               坐标纸(log/log)
  吸水纸                 试管(用于标准品稀释)
  温育箱(37°C ± 1°C)
  洗瓶(用于洗板)
  一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
2准备
 

  1. 洗涤液的准备

试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周.
 

  1. 酶标记抗体的准备

试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量用标记抗体稀释液稀释.
示例:
如果你用一条板(8孔),就需800  μL.的标记抗体.就用870  μL的标记抗体稀释液稀释30  μL浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL
浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验
剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C
 

  1. 标准品的准备

加0.5 mL的去离子水到瓶装标准品,制成200 pg/mL的人GIP标准品液
 

  1. 标准品的稀释

准备8支试管,并每支各加230 μL  EIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:
试管1                            100 pg/mL
试管2                            50 pg/mL
试管3                                                25 pg/mL
试管4                                               12.5 pg/mL
试管5                                                6.3 pg/mL
试管6                                                3.1 pg/mL
试管7                                                1.6 pg/mL
试管8                                    0 pg/mL(样品空白对照)
吸取230ul的标准品液于1号管混匀,然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀,如下图所示,按此规律稀释,第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照

 

  1. 样品稀释

 样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释
 如果样品中人GIP的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释浓度的样品液来确定zui佳的检测浓度.
3实验步骤
使用前,将所有试剂应平衡至室温,大约30min,充分混匀,确保试剂质量无改变,标准曲线和样品检测必须同时进行.
 

试剂 待检测样品 标准品 样品空白 试剂空白
检测样品100ul 稀释标准品(1-7管)100ul EIA缓冲液(第8管)100ul EIA缓冲液100ul
盖板,于37°C下温育60min
洗板4次
酶标抗体 100ul 100ul 100ul -
盖板,于4°C下温育60min
洗板5次
显色剂 100ul 100ul 100ul 100ul
室温避光温育30min
终止液 100ul 100ul 100ul 100ul
加终止液后,30min内于450nm处读取OD值

 

1)设试剂空白对照,并于相应的微孔中加入100ul EIA缓冲液
2)  确定好样品空白对照孔,检测样品孔和标准品孔,分别将100ul样品对照品(8号管)、检测样品和稀释好的标准品(1-7号管)加入到相应的微孔中。
3)盖板,37°C下温育60min
4)用洗涤瓶或自动洗板机按以下说明洗板4次
    倒去孔内反应液,每孔加满稀释洗涤液洗板,再弃去废液.重复洗板4.在吸水纸上拍干,去除残留液滴.
5)除试剂空白对照孔外,其余每孔各加100ul酶标抗体
6)盖板,4°C下温育60min
7)按照上述步骤4)洗板5次
8)  用一次性试管取所需量的显色剂,各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染,勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中
9)室温避光温育30min,加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色
10)每孔各加100ul终止液,溶液颜色会变成黄色
11)擦去微孔板底部的污迹或水滴,确保微孔内溶液无气泡产生.加入终止液后30min内于酶标仪450nm处读取结果
 
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特别注意日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。

 

  1. 收集样品后即尽快检测. 如需保存, 冻存样品,但要避免反复冻融.检测前,将样品解冻至室温.
  2. 如样品需稀释,用EIA缓冲液稀释
  3. 建议做双份检测
  4. 保持样品处于中性PH范围.有机溶剂的污染会影响实验结果
  5. 只能用本试剂盒提供的洗涤液洗板.不充足的洗板会导致错误的结果
  6. 在吸水纸上拍干去除残留液滴时,切勿用吸水纸刮擦孔内壁
  7. 显示剂应避光保存并避免与金属物质接触
  8. 加终止液后,30 min内就应读取实验结果

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结果计算日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
所有实验数据(包括标准品,检测样品的OD值),都应减去样品空白对照的OD值.
在log-log坐标纸用,以较正的OD值为纵坐标,相对应的浓度为横坐标,建立标准曲线. 样品直接在标准曲线上获取浓度值.
标准曲线示范

 
上图所示典型标准曲线仅用于演示示范,不能用于试验数据的获取.每次实验都应建立其标准曲线.
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常规事项日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。
1所有试剂置于2 - 8°C保存.实验前将试剂平衡至室温(约30分钟)
2瓶装标准品是冻干品,故小心打开瓶盖
3终止液是强酸物质.使用时,避免其接触皮肤和衣肤.
4弃置用过的物质前,用水冲洗
5 浓缩酶标抗体,EIA缓冲液和浓缩洗涤液可能会出现沉淀,但这并不会影响实验
6使用试剂后应洗手
7切勿混用不同批号的试剂
8别使用过期的试剂
9试剂盒仅供研究用,不能用于临床诊断.
 
 
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存储与有效期日本IBL中国*代理,。日本IBL中国*代理,。

存储条件:2 - 8°C
有效期见试剂盒外包装
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本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
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