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人可溶性肾素(前体)受体ELISA检测试剂盒

人可溶性肾素前体受体ELISA检测试剂盒
日本IBL原装进口,货号:27782
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日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
简介
肾素受体(RR)是肾素和肾素前体的共同受体.当肾素与其受体结合后, 肾素作用于全身循环及局部组织中的血管紧张素,使其变成血管紧张素1,另外肾素受体受刺激后会激活细胞内的信号通道.
公认地对RR的研究对抑制过度活跃的肾素-血管紧缩素-醛固酮系统提供重要的研究方略.
(P)RR是一种分子量为39 kDa的单跨膜受体蛋白.据报道其中的29 kDa的可溶性片段是由于RR的裂解而产生的.因此定量的检测血液或尿液中的可溶性(P)RR可以作为检测发病新的辅助工具,作为解释其病理机制的新途径.
此ELSIA检测试剂盒可以定量检测人血液和尿液中的可溶性肾素(前体)受体。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
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实验原理日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
此试剂盒基于酶免法的夹心原理,利用两种高特异性抗体,TMB作为显色剂,显色的强度与人肾素受体的量成正比
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检测范围日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

125~8000pg/ml
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预期用途日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。
仅用于研究,不能用于诊断
此试剂盒可用于血清,EDTA-血浆,尿液和细胞培养上清液中人肾素受体的定量检测
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试剂盒组成日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

 

  1. 预包被板,抗人肾素受体兔IgG,亲和纯化            96孔
  2. 标记抗体浓缩液,

30X,HRP标记抗人肾素受体(93A1B)小鼠IgGFab’   0.4mlx1
 

  1. 标准品,重组人肾素受体                           0.5mlx2
  2. EIA缓冲液,1%BSA,含0.05%吐温20的PBS        30mlx1
  3. 标记抗体稀释液,1%BSA,含0.05%吐温20的PBS   12mlx1
  4. 着色剂,TMB底物液                              15mlx1
  5. 终止液,1N硫酸                                  12mlx1
  6. 洗涤缓冲浓缩液,40X,含0.05%吐温20的磷酸缓冲液   50mlx1

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实验所需材料但试剂盒未提供日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

 

  1. 酶标仪
  2. 微移液管和枪头
  3. 烧杯
  4. 去离子水
  5. 冰箱(4℃)
  6. 坐标纸
  7. 吸水纸
  8. 用于稀释标准品的试管
  9. 洗瓶
  10. 一次性试验管

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试剂准备日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

 

  1. 洗涤缓冲液制备:先将洗涤浓缩液平衡至室温,充分混匀,然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀,即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内,并于2周内用完
  2. 标记抗体的制备:用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍,即得。

如:如果只测一条板,8孔,则需要标记抗体800ul(30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液,混匀,使用时每孔加100ul)
此步骤在实验前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内,保存在4℃
 

  1. 标准品的制备:吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内,充分混匀,得到1600pg/ml的人肾素受体标准品
  2. 标准品的稀释:准备8个试管用于标准品的稀释,每管加入230ul的EIA缓冲液

每管的浓度如下
1号管                 8000pg/ml
2号管                 4000 pg/ml
3号管                 2000 pg/ml
4号管                 1000 pg/ml
5号管                 500 pg/ml
6号管                 250 pg/ml
7号管                 125 pg/ml
8号管                 0ng/ml(试验样品空白)
吸取230ul的标准品于1号管混匀,然后从1号管吸取230ul加入2号管,依次连续稀释,标准品范围为8000~125 pg/ml

 

  1. 样品稀释:样品用EIA缓冲液稀释。如果样品浓度未知,建议稀释几个不同比例的样品进行检测,来确定样品zui佳稀释比例

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实验步骤日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

使用前,所有样品应平衡至室温,大约30min,然后充分混匀,确保试剂质量无变化,标准曲线和样品检测同时进行

试剂 检测样品 标准品 检测样品对照孔 试剂对照孔
检测样品100ul 稀释标准品(1-7管)100ul EIA缓冲液(第8管)100ul EIA缓冲液100ul
盖板,4℃下孵育过夜
洗板4次
酶标抗体 100ul 100ul 100ul -
盖板,4℃下温育60min
洗板5次
显色剂 100ul 100ul 100ul 100ul
室温避光温育30min
终止液 100ul 100ul 100ul 100ul
加终止液后,30min内于酶标仪450nm处读取OD值

 

 
 

  1. 确定试剂空白孔并加入100 μL  EIA缓冲液
  2. 各加加100ul试验样品空白,样品和稀释的标准品至相应的孔内
  3. 盖板,4℃下孵育过夜
  4. 洗板,重复4次以上,吸水纸上拍干
  5. 每孔加入100ul的标记抗体液,除试剂空白孔外
  6. 盖板,4℃下孵育60min
  7. 洗板5次,同步骤四
  8. 吸取试验所需的TMB底物液于一次性试管内,每孔加入100ul的TMB底物液。剩余的TMB底物液不能再放回至原装瓶内
  9. 黑暗处,室温下孵育30min,溶液变蓝
  10. 每孔加入100ul的终止液,溶液变蓝
  11. 擦去微孔板底部的污点或水滴,终止液加入后30min内,在酶标仪450nm处读数

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特别注意日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

 

  1. 试验样品采集后应立即检测或是冻存,冻存的样品避免反复冻融,检测前应在低温下先将其完全溶解混匀
  2. 试验样品用EIA缓冲液稀释,
  3. 试验样品和标准品应做双份检测
  4. 试验样品应在中性PH范围,有机溶剂的污染可能会影响检测
  5. 只能用试剂盒提供的洗涤液洗板,否则会导致试验失败
  6. 吸水纸上拍干微孔板,不能擦拭
  7. TMB底物液应贮存于黑暗处,因其对光敏感,且避免接触金属
  8. 加入终止液后30min内必须酶标仪读数

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结果计算日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。日本IBL中国*代理,人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒。

绘制曲线前,所有的数据都应减去试验样品空白值,包括标准品和未知的样品。以标准品的OD值和浓度在对数-对数坐标纸上绘制标准曲线,从标准曲线上可直接读取未知样品的浓度
 
附:采用全自动酶标仪检测,只需检测前设置好酶标仪的相关参数,如坐标参数(线性,半对数)和计算方式参数(三次回归、四参数或双对数曲线方程),即可直接得到结果
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本译文仅供参考,详情请以原文为准。
 
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