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C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒

C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒
德国DRG进口原装货号EIA3954 规格96T
德国DRG中国*代理商深圳科润达生物工程有限公司


用于体外诊断用
存储于2 °C – 8 °C.
 
产品名
C反应蛋白超敏检测试剂盒(酶联免疫法)
 
预期用途
此超敏CRP ELISA检测试剂盒能用于人血清中C反应蛋白的定量检测.检测C反应蛋白可用于感染,组织损伤,炎症和相关疾病的辅助检测.
 
简介
C反应蛋白于1930年由Tilet和Francis在肺炎患者血清中鉴别出来,因其能结合和沉淀肺炎球菌C多糖而得名.它是一种分子量约为110,000-140,000道尔顿,由5个相同亚单位(由非共价键结合成的循环五聚物)组成的α球蛋白.C反应蛋白在肝脏中合成,正常情况下血清和血浆含量很少,浓度约为0.3 mg/dl.它具有广泛的生理学意义,但与其它免疫球蛋白具有几种相似的功理,主要表现为机体防御.
C反应蛋白是种急性期蛋白,在多种疾病的非特异性反应过程中(包括革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物感染,风湿性关节炎,腹脓肿,胆管发炎等),患者血清和血浆中的含量水平都会剧增.在格林-巴利综合征,多发性硬化,特定的病毒感染,肺结核,急性传染性肝炎,多种神经和炎症疾病,灼伤和外科术后的病人体内也能观察到高浓度的C反应蛋白.
尽管检测血清中C反应蛋白上升的浓度不能作为特定疾病的指标,但对于多种炎症的病发研究是很有意义的.急性组织损伤后,在24-48小时内血清或血浆中C反应蛋白的浓度就迅速上升,急性期间达到顶峰(大约上升1000倍),创伤或炎症治疗后,其浓度立即下降.人血清或血浆中C反应蛋白的浓度,在降至正常水平前会持续几天的上升.检测C反应蛋白可作为炎症病变过程的标记物,甚至比红细胞沉降速度这种指标更可靠和灵敏.因为红细胞沉降速度会受到非炎症进程机体的生理变化的影响.常见检测C反应蛋白的方法包括:乳胶凝集试验,比浊法,放射免疫扩散法.但这些方法的灵敏度都很低,而ELISA方法的灵敏度和特异性更高.
由于上升浓度的C反应蛋白往往与病理改变存在紧密,故也可作为诊断,治疗,炎症监测和相关病症的有效辅助工具.此外,通过高灵敏度的方法检测C 反应蛋白也可增强其它心肌标记物(如肌红蛋白,肌钙蛋白I和T)的预测价值,有利于心血管和外围血管疾病的风险评估.由于C反应蛋白值的上升为非特异性,所以需结合患者病历评估与先前的检测值作对比进行分析.
 
 
实验原理
超敏CRP检测试剂盒基于酶免法原理,试验中采用了抗CRP的特异性单克隆抗体,包被板上包被了抗CRP抗体鼠单抗,,HRP标记的抗CRP抗体羊抗,试验样本与这两个抗体反应,样本中CRP分子在固相抗体和酶联物抗体之间,室温下45min孵育过后,洗板,除去未结合的标记抗体,TMB底物液加入,孵育20min,变成蓝色,以1N HCL终止颜色反应,变成黄色
样本中的CRP浓度与颜色强度成正比,450nm处检测吸光值
试剂盒组成
 

  1. 包被板,96孔,包被有抗CRP小鼠单抗
  2. 标准品,1.0ml/支,浓度分别为:0;0.005;0.010;0.025;0.050;0.100mg/L,,    含防腐剂,即用
  3. 样本稀释液,50ml/支,含磷酸缓冲液-BSA溶液,含防腐剂
  4. 酶联物,12ml/支,含HRP标记的抗CRP羊抗,含防腐剂
  5. TMB底物液,11ml/瓶,TMB
  6. 终止液,11ml/瓶,1N 盐酸

实验所需器材但试剂盒未提供
 

  1. 移液器:5ul;10ul;50ul;100ul;1.0ml
  2. 一次性枪头
  3. 酶标仪
  4. 混合器或相关仪器
  5. 吸水纸
  6. 坐标纸

贮存条件
 

  1. 未开封的试剂盒可在2-8℃下保存至有效期
  2. 保持微孔板保存于含有干燥剂的密封袋内,尽可能避免接触潮湿的空气

试剂准备
 

  1. 实验前将所有试剂平衡至室温(18 °C – 25 °C)
  2. 实验前病人血清应稀释100倍,如5ul的血清+495ul的样本稀释液;

标准品不需要稀释
 

  1. 稀释后的样本CRP浓度仍超过了10mg/L时,应进一步进行稀释(10倍)(如10ul 已100倍稀释的样本+90ul样本稀释液)

样本采集与准备
 

  1. 此试验需使用血清样本
  2. 标准静脉采血技术采集样本,采集后60min内分离出血清
  3. 24小时内样本不使用的话,需贮存于-20℃或更低,可保存6个月
  4. 避免使用溶血(鲜红色),脂血(乳白色)或浑浊样本(离心后)
  5. 样本不能反复冻融,不要将样本贮存于无霜冷冻机内,冻存的样本和浑浊样本或含有其他微粒物质的样本,在使用前都需要进行离心

操作注意事项
 

  1. 加样建议(单通道或多通道):所有标准品,样本和质控加样应在3min之内完成
  2. 所有标准品,样本和质控都做双孔检测
  3. 加入终止液后15min内读数

实验步骤
 

  1. 实验前病人样本和质控稀释100倍,见“试剂准备”;不要稀释标准品
  2. 将实验所需包被板固定于板架上
  3. 将10ul的标准品,稀释的样本稀释的质控加于相应孔内
  4. 每孔加100ul的CRP酶联物
  5. 充分混合30秒,充分混合相当重要
  6. 室温下(18-25℃)孵育45min
  7. 迅速弃去反应液,用去离子水或双蒸水洗板5次,不要使用自来水
  8. 吸水纸上拍干,去除残留液滴
  9. 每孔加100ul的TMB底物液,轻轻混合5秒
  10. 室温下孵育20min
  11. 每孔加终止液100ul
  12. 轻轻混合30秒,确保蓝色溶液全转变为黄色
  13. 15min酶标仪上读数(450nm)

结果计算
 

  1. 计算各标准品,样本的平均OD值
  2. 以标准品的浓度为X轴,OD值为Y值,绘制标准曲线
  3. 样本浓度值可从标准曲线上直接得到;也可使用相关数据处理软件得到实验结果
  4. 所得样本浓度值还需乘以稀释因子100,而得到zui终结果
  5. 若样本浓度高于10mg/L,需进一步稀释(10倍),所得结果需乘以1000
  6. 注意:病人样本CRP浓度低于0.1mg/L的记录为<0.1mg/LCRP

标准曲线示范
 
以下为以CRP的浓度为X轴,相应的吸光值为Y轴的典型标准曲线.
提示:此标准曲线仅供演示说明用,不能用于未知样品的计算.每个实验室在每次实验都应建立自已的数据和标准曲线.

期望值
建议每个实验室都应在健康人群的基础上建立自己的正常值范围;以下是出版的文献中提及的健康人群的CRP值
正常血清:0.01—0.35mg/L
成人血清:0.068—8.2mg/L
 
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