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C反应蛋白检测试剂盒(酶联免疫法)

C反应蛋白检测试剂盒(酶联免疫法
(德国DRG原装进口货号EIA4584 规格96T)
德国DRG中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 

实验原理
包被板上包被有抗CRP抗体,与稀释标准品和样本一起孵育,孵育中,CRP特异性结合包被抗体,洗板除去未结合的血清蛋白,抗原-抗体混合物与过氧化物酶酶联物抗体反应,洗涤除去为结合酶联物,加入含有TMB和过氧化氢的着色液孵育,与微孔板结合的免疫复合物的量与颜色强度成正比,加0.5M硫酸终止反应,450nm处检测吸光值
以标准品浓度和OD值做标准曲线,样本CRP浓度可直接从标准曲线上得出
此试剂盒在美国仅用于科研
 
试剂盒组成
 

  1. 包被板,96孔,包被有抗人CRP单克隆抗体
  2. 标准品,5瓶,0.2ml,含1/10的预稀释标准品,浓度为:0;0.4;1;5;10ug/ml
  3. 酶联物,1瓶,12ml,含过氧化物标记的抗人CRP单抗;抗菌剂和惰性红色染料
  4. 样本稀释液,1瓶,40ml,5X浓缩,含0.09%NaN 3和抗菌剂,惰性绿色染料
  5. 洗涤液,1瓶,50ml,20X浓缩,含磷酸缓冲洗涤液
  6. 底物液,1瓶,15ml,含过氧化氢和TMB
  7. 终止液,1瓶,12ml,0.5M硫酸

 
实验所需材料但试剂盒未提供
 

  1. 移液器和枪头
  2. 标准容积的洁净玻璃器皿
  3. 样本稀释用的洁净玻璃试管
  4. 酶标仪(450nm)

 
贮存条件
2-8℃
 

  1. 将微孔板条贮存于原装含干燥剂的密封袋内,直至全部用完
  2. 不要使用过期的试剂

 
样本采集与准备
此实验可用到血清和血浆
采样后立即分离出血清,避免使用溶血,脂血或黄疸血,可能回导致错误结果
将血清转移干净试管
样本可在2-8℃下贮存几天,或冻存更长时间,避免反复冻融
 
一般注意事项
1使用一次性加样枪头加样,避免交叉污染.
2实验前,将所有试剂平衡至室温.试剂混匀时避免产生气泡.
3一旦实验开始,所有实验步骤应中断进行
4吸光值是孵育时间和温度的一条函数.所以应控制好实验加样,建议每次只做20份样品和一组标准品,作双份检测.
 
试剂准备
 
洗涤液:用去离子水稀释50ml的洗涤浓缩液至总体积为1000ml,稀释洗涤液可在2-8℃下至少放置1个月
 
过高温度可能回引起浓缩洗涤液出现浑浊,其并不会有影响,稀释后就会变澄清
 
样本稀释液:用去离子水稀释40ml的样本稀释浓缩液至总体积为200ml,2-8℃下可放置3个月或更长时间,始终保持澄清
 
实验步骤
 

  1. 10倍预稀释标准品血清按如下方法进行1:100稀释:

10ul的标准品至稀释试管内,加990ul的已稀释的样本稀释液,混合
 

  1. 样本按1:1000分两步进行稀释:10ul的样本血清与990ul的已稀释的样本稀释液,混合;加450ul的已稀释的样本稀释液与50ul的100X的预稀释样本,混合(注意:稀释样本贮存不要超过8小时)
  2. 将100ul的稀释标准品和样本加入相应微孔内
  3. 室温下盖板孵育30±2min
  4. 洗涤缓冲液洗板3次

可选用合适的自动洗板机洗板,或手动洗板:迅速倒到孔内反应液,再注入稀释洗涤液.第三次洗板时,让稀释洗涤液在微孔内停留2-3分钟.每次洗板都要换新的稀释洗涤液.zui后倒掉所有溶液并在吸水纸上拍干,去除残留液滴.
 

  1. 每孔加100ul的酶联物,盖板室温下孵育30±2min
  2. 重复步骤5)洗板
  3. 每孔加100ul的底物液
  4. 避光,室温下孵育10±2min
  5. 每孔加50ul的终止液
  6. 加入终止液后,30min内450nm处酶标仪上读数

 
结果分析与说明
以标准品的吸光度均值与相应的浓度建立zui优标准曲线.
患者样品的浓度通过测的吸光值直接从标准曲线计算出浓度.
根据经验或可利用的计算机方法,也可用其它数据简化分析.
zui低检测浓度
zui低检测浓度约为0.02 µg/ml.
 
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