欢迎来深圳市科润达生物工程有限公司!我们将为您提供周到的服务!销售热线:86-0755-26814430 15711973608
联系我们Contact us
公司名称:深圳市科润达生物工程有限公司
联系人:科润达客服
地址:深圳市坪山区坑梓中兴路14号中城生命科学园A栋3层
首页 > 技术文章 > 人细胞毒素相关蛋白A (CagA)检测试剂盒
人细胞毒素相关蛋白A (CagA)检测试剂盒

人细胞毒素相关蛋白A (CagA)检测试剂盒
(美国DRG进口原装,货号:EIA 4138
美国DRG中国*代理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务
 

酶联检测人血清或血浆中抗CagA IgG抗体

实验原理
此试剂盒基于酶联免疫法,采用HRP酶联物;*次孵育中,样本中的抗CagA IgG 抗体与包被的CagA 抗原结合,洗板除去未结合的,再次孵育,二抗(过氧化物酶标记的抗人IgG)与CagA-抗原-抗体复合物结合,再次洗板后,无色的显色剂(TMB)底物液加入微孔内,与过氧化物酶反应生成了有颜色的复合物,加入硫酸终止颜色反应,酶标仪450nm和405nm处检测颜色强度,标准品和样本中的抗CagA IgG 抗体浓度与颜色强度成正比
 
试剂盒组成
足够用于96人份的试剂
试剂盒贮存于2-8℃
各试剂有效期见试剂瓶标签
试剂盒一旦开封,在2-8℃下可保存2个月
 
 

  1. MTP】包被板,96孔,包被有CagA抗原(重组DNA获得),未用的板条保存于密封袋内2-8℃下
  2. CAL】标准品,6瓶,1.5ml/瓶,抗CagA IgG 血清基质,浓度为0;15;30;60;120;240 RU/ml,即用,红色,叠氮化钠(<0.1%)作为防腐剂
  3. CONJ】酶联物,1瓶,14ml,HRPO标记的小鼠单抗抗人IgG,TRIS 缓冲液,稳定剂,即用,粉色,新霉素作为防腐剂
  4. WASH】洗涤缓冲液(浓缩),1瓶,50ml,PBS-吐温20 ,硫柳汞(<0.05%)作为防腐剂,使用前,用蒸馏水1:20比例稀释;若出现不溶解的晶体,则需在37℃下温育数分钟;稀释的洗涤液可在2-8℃下保存30天
  5. DIL】样本稀释液(浓缩,)1瓶,20ml,血清基质,稳定剂,红色,叠氮化钠(<0.1%)作为防腐剂,使用前以稀释的洗涤液1:20比例稀释;稀释的样本稀释液2-8℃下可保存30天
  6. TMB】显色剂,2瓶,15ml,含柠檬酸-磷酸缓冲液,DMSO和H2O2的TMB,即用
  7. STOP】封闭液,1瓶,14ml,1N的硫酸,即用
  8. CPA】盖板
  9. 塑料包装袋

 
实验所需材料但试剂盒未提供
 

  1. 带一次性枪头的可调的,自动的微量移液器
  2. 干燥箱,调节至37±2℃
  3. 用于试剂稀释的刻度容器
  4. 抽吸式泵或自动洗板设备
  5. 酶标仪(450nm和405nm)
  6. 坐标纸
  7. 蒸馏水

 
此实验还可以用自动酶标仪进行操作
 
样本采集与准备
试验可检测血清或血浆样本
适量的脂血样本不会影响结果,高含量的脂血或溶血样本可能会影响试验,纤维蛋白丝会干扰试验;确保检测前样本是清澈的,样本在2-8℃下可保存1周,想要保存更长时间建议冻存于-20℃,避免反复冻融
使用前:以1:300的比例用先前已稀释的样本稀释液进行样本稀释
     (如:10 ul 样本+ 2990 ul的稀释液)
 
实验步骤
试剂和样本平衡至室温
使用前来回倒置混匀样本
 

  1. 准备的微孔:空白,标准品和样本
  2. 加100 ul 的标准品和先前稀释的样本于相应的微孔内

   注意:标准品不用稀释
 

  1. 空白孔内加100 ul 的样本稀释液
  2. 用试剂盒内提供的胶粘纸张盖住包被板,37±2℃下孵育60±5 min
  3. 350 ul的稀释的洗涤液,洗板4次,吸走微孔内的所有液体
  4. 每孔加100 ul的酶联物
  5. 用试剂盒内提供的胶粘纸张盖住包被板,37±2℃下孵育30±2 min
  6. 按照步骤5)洗板
  7. 每孔加100 ul的显色剂
  8. 37±2℃下孵育15 min,避免直射阳光
  9. 每孔加100 ul的封闭液
  10. 采用合适的酶标仪在50nm处读取吸收值,参考波长620nm(以空白对照孔校零),万一出现了吸收值溢出,则选择在405nm处读数;试验操作结束15min内必须完成读数

(若采用的是自动酶标板设备,依据相关手册操作)
 
实验操作图

包被孔 空白 标准品 样本
试剂      
标准品 - 100 ul -
稀释的样本 - - 100 ul
样本稀释液 100 ul - -
孵育:37±2 ℃,60±5 min
洗板:4 x 350 ul
酶联物 100 ul 100 ul 100 ul
孵育:37±2 ℃,30±2 min
洗板:4 x 350 ul
显色剂 100 ul 100 ul 100 ul
孵育:37℃,15 min
封闭液 100 ul 100 ul 100 ul
读数:450 nm
 
 
结果计算
线性坐标纸上以标准品的浓度为X轴,吸收值为Y轴,绘制标准曲线;相应的抗-CagA IgG抗体浓度(RU/mL)根据各样本吸收值从标准曲线获得
 

  1. 样本IgG 值小于10 RU/mL,则判定为抗CagA IgG 抗体无反应
  2. 样本IgG 值10 -15 RU/mL,则判定为弱反应
  3. 样本IgG 值高于15 RU/mL,则判定为抗CagA IgG 抗体有反应

 
计算示例
以下数值仅供演示示例,不能用于代替实验数值
 
通过标准曲线得到样本抗CagA IgG 抗体滴度为70 RU/mL
 
验证标准
结果计算之前,先确保质控吸收值在以下期望值范围内

描述 期望值
阴性质控 <0.100
OD 值之比(标准品240  RU/mL/标准品15  RU/mL) >2.5
OD 值之比(标准品15  RU/mL/标准品0  RU/mL) >3.5
若数值不在期望值范围内,需重新实验
 
 
本译文仅供参考,请以原说明书为准
 
 
中国*总代理:深圳市科润达生物工程有限公司
办公地址:深圳市南山区蛇口沿山路6号佳利泰大厦7D。
研发地址:深圳市南山区蛇口沿山路10号6楼
:(8线)传真:+86 755 26814431
免费订货:。
技术咨询:,;手机,;
:518067    kerunda@szonline.net
:www.kerunda.com.cn
欢迎索取详细资料,在线:kerunda_tech
 
 

地址:深圳市坪山区坑梓中兴路14号中城生命科学园A栋3层
联系人:科润达客服

深圳市科润达生物工程有限公司 版权所有  主营:TNF-α检测试剂盒|HMGB1多克隆抗体|糖代谢相关检测试剂|美国Invitrogen细胞因子

ICP备案号:粤ICP备18097826号 管理登陆 技术支持:化工仪器网   总流量:271275  网站地图

在线客服
在线客服
扫码关注我们
用心服务 成就你我