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检测铁调素检测试剂的正确步骤你学会了吗?
  铁调素是人体内的一种铁平衡调节多肽。活性多肽铁调素-25主要是在肝脏中产生,通过蛋白质溶解切割前铁调素的C-端的25个氨基酸所产生的。随后,N-端的铁调素-25转化为更小的多肽(大约20~24个氨基酸),这些多肽活性更低并且在尿液中累积。
  铁调素检测试剂采用的是竞争酶联免疫法微孔板上包被了能与生物活性铁调素-25分子抗原位点特异性结合的单克隆抗体;样本中的内源性铁调素与生物素化铁调素竞争结合包被抗体,温育后洗去未结合的部分;加入链霉亲和素-过氧化物酶复合物温育,洗涤;加入底物液,短时间的孵育,发生颜色变化反应;样本中铁调素浓度与颜色的强度成反比。
  检测步骤
  铁调素检测试剂每次实验都应建立标准曲线
  1、将实验所需的板条固定于板架上
  2、每孔加100ul的分析缓冲液
  3、加20ul的标准品、质控品和样本于相应的微孔内
  4、每孔加入50ul的酶复合物,充分混匀10秒钟
  5、室温下,温育60分钟(300~700rpm)
  6、弃去孔内反应液,每孔加300ul的洗涤液洗板4次(手动)或400ul洗板3次(洗板机)
  7、每孔加100ul的酶联物
  8、室温下30分钟(无需振摇)
  9、重复步骤6
  10、每孔加100ul的底物液
  11、室温下温育20分钟
  12、每孔加100ul的终止液
  13、铁调素检测试剂加入终止液10分钟内,在酶标仪450±10nm处检测吸收值
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