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使用铁调素检测试剂盒怎么收集和保存样品?
  铁调素检测试剂采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被铁调素(Hepcidin)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。
 
  用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的铁调素(Hepcidin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  铁调素是一种在2000年被发现的由HAMP基因编码并在肝脏中表达的肽类激素,由于其肝脏表达和抗微生物活性而被称为“hepcidin”,它控制十二指肠内铁的摄取和巨噬细胞释放的铁,并可能参与铁向不同器官的分布。
 
  铁调素被认为在阻断下列血液流入血浆中具有至关重要的作用:十二指肠吸收,巨噬细胞释放,肝细胞储存铁的动员,以及与炎症贫血有关的一切。在与感染自身免疫性疾病,危重疾病,肥胖和急性心肌梗塞等炎性疾病相关的贫血中也观察到异常升高的hepcidin水平。
 
  样品收集、处理及保存方法:
 
  1、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
 
  2、血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
 
  3、细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
 
  4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
 
  5、保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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