寨卡病毒(IgM抗体)酶联诊断试剂盒—德国IBL*
【产品名称】
中文名称:寨卡病毒IgM检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Zika virus IgM micro-capture ELISA
【规格】
96T
【预期用途】
寨卡病毒IgM抗体酶联诊断试剂盒用于人血清或血浆(柠檬酸、肝素)中抗寨卡病毒IgM抗体的定性检测。
【前言简介】
寨卡病毒是一种单链RNA病毒,属黄病毒科家族(黄病毒属)。它于1947年在乌干达的寨卡森林进行黄热病研究中从一只恒河猴身上*分离出来。自从被发现后,寨卡病毒被发现在在非洲和亚洲流行。2007年寨卡病毒被报道出现在雅浦岛、密克罗尼西亚群岛上,这意味着寨卡病毒已传播出非洲和亚洲。自2003年以来,法属波利尼西亚、新加勒多尼亚、库克群岛、复活节岛(智利)、萨摩亚和瓦努阿图等均有寨卡病毒的出现,在2015年初期,它开始蔓延至巴西和美洲的其他国家。
寨卡病毒主要是靠受感染的伊蚊类蚊子叮咬进行传播的,然而一些不太常见的传播模式如血液传播、母婴传播及性接触等均有报道。
寨卡病毒的潜伏期目前还不太清楚,但有可能是几天。句估计,大约只有五分之一的寨卡病毒感染者出现的相应的体征和症状。被寨卡病毒感染后出现的临床与登革热和基孔肯雅热出的临床表现类似,但是通常比较温和。zui常见的临床症状为斑丘疹、低烧、关节痛、肌痛、头痛和结膜炎,少部分会出现水肿、喉咙痛咳嗽、呕吐等。
人类感染的寨卡病毒传染病通常是温和的且是自限的。通常在3-7天后气临床症状会自行缓解,关节痛可能或持续一个月。在极少数的情况下,寨卡病毒感染的吉兰--巴雷综合征,可能会引起周围神经的紊乱。此外在怀孕期间感染寨卡病毒有可能引起胎儿先天性颅脑畸形。
种类 | 疾病 | 临床症状 | 感染机制 |
寨卡病毒 | 寨卡热 | 发烧、头痛、眼眶痛、结膜炎、斑丘疹、肌痛、关节痛等 | 主要是通过埃及伊蚊叮咬传播 |
主要检测方法:
1. 细胞培养分离
2. PCR
3. 血清学:IF、ELISA
4. 蚀斑减少中和试验(PRNT)
【检测原理】
寨卡病毒IgM抗体酶联诊断试剂盒采用酶联免疫法中的μ链捕获法技术。样本中的抗体与微孔板包被的抗人IgM抗体结合,经洗涤除去未结合的部分,然后加入辣根过氧化物酶标记的寨卡病毒抗原,该酶联物捕获特异性的IgM抗体,在经第二次洗涤除去未结合的酶联物,加入底物液后产生蓝色产物,产物的颜色强度与样本中IgM抗体的量成正比。随后加入终止液终止反应,并在450/620 nm处读取吸光度。
【试剂盒组成】
包被板MTP 12×8
包被有抗人IgM抗体。
酶联物ENZCONJ 1×15mL
HPR标记的寨卡病毒,红色,黑盖,即用型
IgM阳性质控CONTROL + 1×2mL
人血清或血浆,黄色,红盖,即用型
IgM阴性质控CONTROL - 1×2mL
人血清或血浆,黄色,蓝盖,即用型
IgM临界质控CONTROL CO 1×3mL
人血清或血浆,黄色,绿盖,即用型
样本稀释液SAMPLEDIL 1×100mL
磷酸盐缓冲液(10 mM),pH 7.2 ± 0.2,黄色,白盖,即用型
洗涤液(20×)WASHBUF CONC 1×50mL
磷酸盐缓冲液(0.2 M), pH 7.2 ± 0.2,白盖
TMB底物液TMB SUBS 1×15mL
黄盖,即用型
终止液TMB STOP 1×15mL
0.2 mol/L的硫酸,红盖,即用型
封板纸 1张
实验所需材料(未提供)
1. 酶标仪
2. 37 °C保温箱
3. 手动或全自动洗板设备
4. 10-1000μL的移液器
5. 漩涡振荡器
6. 蒸馏水
7. 一次性试管
【储存及效期】
将寨卡病毒IgM抗体酶联诊断试剂盒置于2 - 8 °C条件下。已经开启过的试剂于2 - 8 °C下可保存至标签上的效期。
【样本要求】
血清、血浆(柠檬酸、肝素)样本在2 - 8 °C下可保存5天,如要保存更长时间,则需分装冻存至-70 - -20°C。使用前解冻并充分混匀。避免反复冻融。建议不要使用热灭活样本。
【检测方法】
实验开始前将所有试剂和样本平衡至室温。
试剂准备
洗涤液:用蒸馏水按1:19进行稀释,例如:10mL浓缩洗涤液 + 190mL蒸馏水,充分混匀。配制好的洗涤液在室温下(2 0- 25 °C)可存放5天。若浓缩液中含有晶体,可放在37 °C条件下使其充分溶解后再进行稀释。
样本准备:实验开始前,所有样本均按1:100的比例用样本稀释液进行稀释。
如:10 μL样本+1mL的样本稀释液,充分混匀。
检测步骤(详询)
结果判定
临界值 | 10 U | |
阳性 | > 11 U | 机体现存在抗体。与抗原有接触 |
灰区 | 9 – 11 U | 不清楚机体是否存在抗体,建议2到4周后在重新抽样检测,如果还在灰区则判定为阴性 |
阴性 | < 9 U | 样本中不存在抗病原体的抗体。先前与抗原无接触 |
传染性疾病的诊断不应建议在单个的检测结果上,准确的诊断还应考虑其病史、临床症状和血清学数据。在免疫功能低下的患者和新生儿的血清数据只能得到有限的数值。 |
【产品性能指标】
特异性:98.5 %
灵敏度:100 %
局限性:细菌污染或反复冻融会影响样本的吸光度。
【注意事项】
操作注意事项
1. 样品的不合理处理及实验操作的任何改动都将影响实验的结果。取样体积、温育时间、预处理步骤都必须严格按说明进行。只能使用标准取样器和标准设备。
2. 一旦实验开始,所有的步骤都必须完整的进行下去,不允许中断。在使用前,将所有试剂和样品都平衡至室温(18-25℃),轻轻摇动液体试剂和样品,试剂混合过程中要避免气泡。
3. 避免污染试剂、取样器、微孔/试管。加试剂和样本时,请使用新的取样吸头。不要交换瓶盖。盖好不使用的试剂。不要重复使用微孔/试管或者试剂。
4. 温育时间会影响实验结果。微孔加样的顺序和时间都必须*。建议使用8孔微量取样器给微孔加样。
5. 微孔板的清洗非常重要,微孔清洗不好将会形成错误的实验结果。建议使用多孔取样器或自动微孔清洗设备进行清洗。每次温育间隔期间要避免微孔干燥。加洗涤液和吸液时要避免碰到微孔。清洗和加试剂时都应特别小心。清洗时,在微孔中精确的加入洗涤液缓冲液,同时确保微孔中无残渣。
6. 湿度会影响微孔板,所以在未到达室温时请勿打开包装,未使用的微孔板要重新密封于装有干燥剂的包装袋中。
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