大鼠IFN-γ检测试剂盒（ELISA）

elisa操作终止及读板过程常见问题及解答：

1. 终止液加样时产生气泡；
2. 终止不均匀
3. 酶标板板底脏污
4. 读数波长错误，
5. 终止液加入后，长时间不读板

解决办法：

1. 加终止液时，应避免起泡，以免造成假阳性
2. 终止液加入后应轻轻振板，使终止液与板孔内溶液充分混匀；
3. 酶标板读数前，应轻轻拭去板底的水迹和污物，保证板底干洁，以免影响读数；
4. 应根据底物液选择合适的读数波长，如TMB一般选择450nm波长，PNPP一般选择405nm波长等；

加入终止液后，应尽快读板，酶标板内颜色会随着终止时间的延长而变淡，因此，*是在终止后10分钟内读板。

通用名称：大鼠IFN-γ检测试剂盒（ELISA法）
英文名称：RayBio® Rat IFN-gamma ELISA Kit
产品货号：ELR-IFN-γ
产品规格：96T
检测样本：血清、血浆、细胞上清液
公司品牌：美国RayBio
储存条件：-20℃
检测方法：ELISA方法
预期用途：定量测定大鼠血清、血浆和细胞培养上清液中的IFN-γ的含量
参考价格：询价
供应商家：深圳市科润达生物工程有限公司 

大鼠IFN-γELISA试剂盒预期用途

RayBio®大鼠IFN-γ ELISA试剂盒采用体外酶联免疫吸附测定法，定量测定大鼠血清（正常血清和血浆中的大鼠IFN-γ浓度低，在该测定中可能无法检测到），血浆和细胞培养上清液中的IFN-γ的含量。

大鼠IFN-γELISA试剂盒检测原理

大鼠IFN-γ检测试剂盒使用包被有IFN-γ特异性抗体的96孔酶标板，标准品和样品被加入到孔中，样品中存在的IFN-γ通过固相的抗体与孔结合。洗涤后加入生物素化的抗大鼠IFN-γ抗体。 洗去未结合的生物素化抗体后，将HRP-标记的链霉素加入到到孔中。 再次洗涤板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物显色与所结合的IFN-γ量成比例。 加入终止液颜色从蓝色变为黄色，并且在450nm处测量颜色的吸光度值。

大鼠IFN-γ检测试剂盒组成成分
●IFN-γ酶标板（项目A）——12*8=96孔，包被有抗人IFN-γ抗体——4℃ 1个月
●浓缩洗涤液（20x）（项目B）——20x浓缩溶液 25ml ——4℃ 1个月
●标准蛋白（项目C）——2瓶人类IFN-γ。1个小瓶就够配制每个一式两份的标准品。——-80℃1个月
●检测抗体IFN-γ（项目F）——2瓶生物素化的抗大鼠IFN-γ。
●每个小瓶足以测定微板的一半。——4℃ 5天
●浓缩HRP-链霉亲和素（项目G）——200μl 200X浓缩HRP缀合链霉亲和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物（项目H）——TMB溶液12ml ——N/A
●终止液（项目I）——8ml 0.2M硫酸——N/A
●测定稀释剂A（项目D）——30ml稀释缓冲液，0.09％Sodium azide防腐剂。——N/A
●测定稀释剂B（项目E）——15ml 5X浓缩液——4℃ 1个月

大鼠IFN-γ检测所需材料（试剂盒内不提供）
●能够测量450 nm处吸光度的酶标仪。
●提供2μl至1 ml体积的精密移液管。
●可调1-25毫升移液器用于试剂制备。
●100毫升和1升刻度量筒。
● 吸水纸。
● 蒸馏水或去离子水。
●双对数做图纸或计算机和软件进行ELISA数据分析。
●准备标准品或样品稀释液的管子。

大鼠IFN-γ检测试剂盒检测步骤

●使用前将所有试剂和样品置于室温（18 - 25ºC）。建议所有标准和样品至少重复一次。
●根据您的实验标记可拆卸的8孔条。
●分别加入样品和每个标准品100μl（参见试剂制备步骤3）到适当的板孔中。盖上盖子，室温温和振荡孵育2.5小时
●弃去溶液，用1X洗涤液洗涤4次。使用多通道移液器或自动洗板机洗板，每孔加入洗涤缓冲液（300μl）。每个步骤中去除液体对于良好的性能是至关重要的。洗完后，通过吸取或倾析清除任何剩余的洗涤缓冲液。倒置板并用干净的吸水纸吸干印迹。
●每孔加入100μl1X制备的生物素化抗体（试剂制备步骤6）。在室温下温和振荡孵育1小时。
●弃去溶液。重复洗涤，如步骤4。
●加入100μl制备的链霉亲和素溶液（见试剂制备步骤7）。在室温下温和摇动孵育45分钟。
●弃去溶液。 重复洗涤，如步骤4。
●向每个孔中加入100μlTMB一步底物试剂（项目H）。在室温下在黑暗中轻轻振荡孵育30分钟。
●向每个孔中加入50μl终止液（项目I）。 立即读取450 nm处吸光度值。

大鼠IFN-γ检测试剂盒存储

大鼠IFN-γ检测试剂盒可在-20°C下保存，从装运之日起存放可长达1年。 避免反复冻融循环。 试剂盒可以在4℃下储存长达6个月。 对于更长时间储存时，建议储存在-80°C。 该试剂盒组分见下表

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