人TNF-β检测试剂盒(ELISA)
ELISA操作孵育过程常见问题及解答:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。
3)孵育温度未按照说明书要求进行,温度过高或过低;
解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间和孵育温度。
通用名称:人TNF-β检测试剂盒(ELISA法)
英文名称:RayBio® Human TNF-alphβ ELISA Kit
产品货号:TNF-b
产品规格:96T
检测样本:血清、血浆、细胞上清液
公司品牌:美国RayBio
储存条件:-20℃
检测方法:ELISA方法
预期用途:定量测定人血清血浆和细胞培养上清液中的TNF-β的含量
参考价格:询价
供应商家:深圳市科润达生物工程有限公司
人TNF-βELISA试剂盒预期用途
RayBio®人TNF-β细胞因子酶免试剂盒采用体外酶联免疫吸附测定法,定量测定人血清(正常血清和血浆中的人TNF-β浓度低,在该测定中可能无法检测到),血浆和细胞培养上清液中的TNF-β的含量。
人TNF-β检测试剂盒组成成分
●TNF-β酶标板(项目A)——12*8=96孔,包被有抗人TNF-β抗体——4℃ 1个月
●浓缩洗涤液(20x)(项目B)——20x浓缩溶液 25ml——4℃ 1个月
●标准蛋白(项目C)——2瓶人类TNF-β。1个小瓶就够配制每个一式两份的标准品。—— -80℃1个月
●检测抗体TNF-β(项目F)——2瓶生物素化的抗人TNF-α。
●每个小瓶足以测定微板的一半。——4℃ 5天
●浓缩HRP-链霉亲和素(项目G)——200μl 700X浓缩HRP缀合链霉亲和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物(项目H)——TMB溶液12ml——N/A
●终止液(项目I)——8ml 0.2M硫酸——N/A
●测定稀释剂A(项目D)——30ml稀释缓冲液,0.09%叠氮化呐防腐剂。——N/A
●测定稀释剂B(项目E)——15ml 5X浓缩液——4℃ 1个月
●将未使用的板条重新装回到含有干燥剂包的袋中,沿着整个边缘重新密封。
人TNF-β检测试剂盒检测原理
人TNF-β细胞因子酶免试剂盒使用包被有人TNF-β特异性抗体的96孔酶标板,标准品和样品被加入到孔中,样品中存在的TNF-β通过固相的抗体与孔结合。洗涤后加入生物素化的抗人TNF-β抗体。 洗去未结合的生物素化抗体后,将HRP-标记的链霉素加入到到孔中。 再次洗涤板孔,向孔中加入TMB底物溶液,底物显色与所结合的TNF-β量成比例。 加入终止液颜色从蓝色变为黄色,并且在450nm处测量颜色的吸光度值。
人TNF-β检测试剂盒存储
人TNF-β检测试剂盒可在-20°C下保存,从装运之日起存放可长达1年。 避免反复冻融循环。 试剂盒可以在4℃下储存长达6个月。 对于更长时间储存时,建议储存在-80°C。
人TNF-β检测所需材料(试剂盒内不提供)
●能够测量450 nm处吸光度的酶标仪。
●提供2μl至1 ml体积的精密移液管。
●可调1-25毫升移液器用于试剂制备。
●100毫升和1升刻度量筒。
●吸水纸。
●蒸馏水或去离子水。
●双对数做图纸或计算机和软件进行ELISA数据分析。
●准备标准品或样品稀释液的管子。
人TNF-β检测试剂盒检测步骤
●使用前将所有试剂和样品置于室温(18 - 25ºC)。建议所有标准和样品至少重复一次。
●根据您的实验标记可拆卸的8孔条。
●分别加入样品和每个标准品100μl(参见试剂制备步骤3)到适当的板孔中。盖上盖子,室温温和振荡孵育2.5小时
●弃去溶液,用1X洗涤液洗涤4次。使用多通道移液器或自动洗板机洗板,每孔加入洗涤缓冲液(300μl)。每个步骤中去除液体对于良好的性能是至关重要的。洗完后,通过吸取或倾析清除任何剩余的洗涤缓冲液。倒置板并用干净的吸水纸吸干印迹。
●每孔加入100μl1X制备的生物素化抗体(试剂制备步骤6)。在室温下温和振荡孵育1小时。
●弃去溶液。重复洗涤,如步骤4。
●加入100μl制备的链霉亲和素溶液(见试剂制备步骤7)。在室温下温和摇动孵育45分钟。
●弃去溶液。 重复洗涤,如步骤4。
●向每个孔中加入100μlTMB一步底物试剂(项目H)。在室温下在黑暗中轻轻振荡孵育30分钟。
●向每个孔中加入50μl终止液(项目I)。 立即读取450 nm处吸光度值。
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